Tema 7. TECNICAS BASICAS DE BM.pdf - VeoApuntes.com

Alberto Gómez Esteban & Laura del Olmo• Clínica en la PCR‣ Enfermedad de Huntington (baile de San Vito). Es una enfermedadneurológica degenerativa autosómica dominante que conlleva una alteraciónconductual, motora y de percepción de la realidad.Esta enfermedad está causada por una expansión de triplete (CAG) que en función delnúmero de veces en que aparezca se da una determinada gravedad de la enfermedad.En todos los individuos existe una expansión de este triplete pero:- Si hay 10-35 copias (normalmente 15-20) el individuo es sano.- Si hay 36-121 repeticiones el individuo está afectado por la enfermedad deHuntington.Cuantas más repeticiones existan del CAG más grave será la enfermedad.Estas secuencias se denominan puntos calientes debido a que son altamentemutables en cada replicación de generación a generación. La edad de aparición sesitúa sobre 40-50 años, pero en una expansión muy grande de la secuencia adelanta laaparición de esta patología.2) PCR A TIEMPO REAL: (A) CUANTITATIVA y (B) CUALITATIVAEsta PCR se lleva a cabo en una máquina que permite además de amplificar un producto dePCR cuantificarlo y hacer un análisis cualitativo, aumentando enormemente la sensibilidad delproceso.La característica principal de esta técnica es que se va a monitorizar continuamente laaparición del producto amplificado midiendo la fluorescencia de las cadenas sintetizadas, quees proporcional a la cantidad de amplicones.La cantidad de material de partida se cuantifica mediante el llamado Crossing Point, que setrata de un punto en la gráfica (producto/tiempo) que cuantifica el tiempo que tarda encruzarlo una cantidad de DNA. El tiempo que tarde nos informa de la cantidad de productoinicial.7