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Cálculo de ResultadosDebe determinarse en primer lugar el promedio de densidades ópticas de cada juego de duplicados. Lareactividad para cada muestra se calcula dividiendo la densidad óptica promedio de la muestra por ladensidad óptica promedio del control Histona positivo débil.DO MuestraValor de la Muestra = —————————————————— x Valor ELISA Positivo Débil(unidades) DO ELISA Positivo Débil (unidades)La reactividad de la muestra está relacionada de manera no lineal con la cantidad de anticuerpo presente.Mientras que los aumentos y disminuciones en la concentración de anticuerpos del paciente se reflejarán enel aumento o disminución correspondiente de la reactividad, los cambios no son proporcionales (porejemplo, al doblarse la concentración de anticuerpo no se dobla la reactividad). Si se deseara unacuantificación más precisa de la cantidad de anticuerpo, puede informarse como el título de anticuerpo de lamuestra la última dilución positiva de una serie de diluciones seriadas de la muestra.Interpretación de los ResultadosLa técnica ELISA es muy sensible y es capaz de detectar pequeñas diferencias entre poblaciones depacientes. Los valores presentados a continuación son sólo valores sugeridos. Cada laboratorio debeestablecer su propio rango normal basado en su propia metodología, controles, equipo y población depacientes.La muestra puede clasificarse con un valor negativo, positivo débil, positivo moderado o positivo fuertesegún la tabla siguiente.UnidadesNegativo 2.51. Un resultado positivo indica la presencia de anticuerpos anti Histona y sugiere la posibilidad deLupus Eritematoso Sistémico, LES inducido por fármacos y enfermedades relacionadas con el tejidoconectivo, como la artritis reumatoide, dermatomiositis o el síndrome de Sjögren’s y enfermedadesrelacionadas del tejido conectivo.2. Un resultado negativo indica la ausencia de anticuerpos antihistona o niveles inferiores al punto decorte del ensayo.3. Se sugiere que los resultados informados por el laboratorio incluyan la afirmación “Los siguientesresultados se obtuvieron con el kit INOVA QUANTA Lite TM Histone ELISA. Los valores obtenidoscon kits de diferentes fabricantes pueden variar y no pueden intercambiarse entre ellos. La magnitudde los niveles informados de IgG no puede correlacionarse con un punto final”.Limitaciones del Procedimiento1. La presencia de inmunocomplejos u otros agregados de inmunoglobulinas en la muestra delpaciente puede producir un aumento de uniones inespecíficas y causar falsos positivos en esteensayo.2. No todos los pacientes con LES o lupus inducido por fármacos dan positivo por histona.3. Los resultados de este ensayo deben utilizarse conjuntamente con hallazgos clínicos y otraspruebas serológicas.4. La funcionalidad del ensayo no ha sido establecida para matrices diferentes del suero.Valores EsperadosLa capacidad del procedimiento QUANTA Lite TM Histone ELISA para detectar anticuerpos antihistona seevaluó comparándola con los tests ELISA disponibles en el mercado. Los resultados del test ELISA sedeterminaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante.Rango NormalSe seleccionaron aleatoriamente ciento seis muestras de suero y fueron sometidas al test QUANTA Lite TMHistone ELISA. De estas muestras sólo dos presentaban un cociente de 1.0 o mayor (un positivo con estesistema ELISA). Una de estas muestras también dio un resultado positivo en el test del método dereferencia para anticuerpos antihistona, así como en los dos tests separados de inmunofluorescencia y fueseparada, en consecuencia, de la población normal. La otra muestra dio negativo con el test del método dereferencia de anticuerpos antihistona así como en los dos tests de inmunofluorescencia indirecta diferentesy en consecuencia fue considerado como perteneciente a la población normal. Esta muestra, aparentementeun falso positivo, produjo un cociente de 1.11, que está justo por encima del punto de corte positivo. Elcociente medio de la población fue 0.16, con una desviación estándar de 0.13. El rango de la población fuede 0.04 a 1.11. Esta prueba indica que la media de la población normal tiene una desviación estándar 6.5puntos por debajo de punto de corte.4
Sensibilidad y Especificidad RelativasPara determinar la sensibilidad y especificidad del ensayo, se testaron 42 muestras que habían sidopreviamente sometidas a la prueba de anticuerpos antihistona tanto con INOVA como con otro métodoELISA. De estas 42 muestras, 14 salieron positivas y 28 negativas en ambos métodos. Aparentemente nohubo falsos positivos ni negativos al compararlos con el método de referencia.INOVA+ -+ 14 0 Sensibilidad relativa 100%Método de referencia Especificidad relativa 100%- 0 28 Eficiencia relativa 100%Precisión y ReproducibilidadLa precisión y reproducibilidad del ensayo se midieron mediante seis replicados de muestras positivasfuerte, débil y negativas en cuatro ensayos separados. La reactividad media de los positivos fuerte fue de3.42 unidades, positivos débil fue de 1.34 unidades y la de los negativos fue de 0.28. La desviación estándary el coeficiente de variación para cada muestra se resume a continuación.Negativo Positivo Fuerte Positivo DébilGlobal Conjunto 0.014 4.8% 0.270 8.0% 0.040 3.8%Intra ensayo 0.010 3.4% 0.158 4.6% 0.051 3.8%Inter ensayo 0.014 4.8% 0.260 7.8% 0.037 2.8%Referencias1. Rubin RL, et. al.: Specificity of antihistone antibodies in systemic lupus erythematosus. ArthritisRheum 25: 779, 1982.2. Klajman A, et. al.: The prevalence of antibodies to histone induced by procainamide in old people, incancer patients and in rheumatoid like disease. Clin Immunol Immunopathol 27: 1, 1983.3. Biundo JJ and Cummings NA: Biochemical, hematologic and immunologic tests, Rheumatic Disease,Diagnosis and Management. Edited by AW Katz, Philadelphia, JB Lippincott, p.265, 1977.4. Epstein A and Barland P: The diagnostic value of antihistone antibodies in drug-induced lupuserythematosus. Arthritis Rheum 28: 158, 1985.5. Fritzler MJ and Tan EM: Antibodies to histones in drug-induced and idiopathic lupus erythematosus.J Clin Invest 62: 560, 1978.6. Krippner H, et. al.: Antibodies to histones of the IgG and IgM class in systemic lupus erythematosus.Clin Exp Immunol 58: 49, 1984.7. Gockel S and Binder WL: Immunoglobulin class specificity of antihistone. Arthritis Rheum (suppl) 28:558, 1985.8. Portanova JP, et. al.: Reactivity of anti-histone antibodies induced by procainamide and hydralazine.Clin Immunol Immunopathol 25: 67, 1982.9. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control/NationalInstitutes of Health, 2007, Fifth Edition.Fabricante:INOVA Diagnostics, Inc.9900 Old Grove RoadSan Diego, CA 92131United States of AmericaRepresentante Autorizado:Medical Technology Promedt Consulting GmbHAltenhofstrasse 80D-66386 St. Ingbert, GermanyTel.: +49-6894-581020Fax.: +49-6894-581021www.mt-procons.comTechnical Service 888-545-9495628520ESP June 2009Revision 185
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