QUANTA LiteTM dsDNA - inova

ProcedimientoMateriales Suministrados1. 508370 – Adrenal (Primate) – 1 x 8-well slide (Portaobjetos con glándula suprarrenal de mono – 8 pocillos obien glándula suprarrenal de mono2. 508375 – Adrenal (Primate) – 1 x 4-well slide (Portaobjetos con glándula suprarrenal de mono – 4 pocillos obien glándula suprarrenal de mono3. 508375.10 – Adrenal (Primate) – 10 x 4-well slide (Portaobjetos con glándula suprarrenal de mono – 10 x 4pocillos o bien glándula suprarrenal de mono4. 1 x folleto de instruccionesMaterial necesario no incluido1. Agua destilada para diluir el PBS concentrado.2. Contenedor para el tampón PBS.3. Micropipetas y puntas desechables para aplicar las muestras.4. Cámara húmeda para las incubaciones5. Microscopio de fluorescencia con filtro de excitación de 495nm y filtro barrera de 515nm.6. Botella lavadora para los lavados iniciales con PBS.Los componentes adicionales pueden obtenerse de INOVA Diagnostics, Inc.: PBS (508002), controlnegativo IFA Sistema (508186), conjugado (H&L) adsorbida para mono FITC (504011, 504071), azul deEvans (504049) y medio de montaje PVA (504046, 504047).Procedimiento del testControl de calidadDeben utilizarse controles positivos y negativos cada vez que se ensayen las muestras.1. Medio de montaje: Retirar el medio de montaje del refrigerador para que alcance la temperatura ambiente (18-28°C) antes de su uso.2. Dilución de muestras de pacienteCribado: Diluir las muestras de paciente 1/5 añadiendo 20μL de suero a 80μL de tampón PBS.Titulación: Realizar diluciones seriadas de las muestras cribadas positivas con el tampón PBS (p.ej. 1/10,1/20, 1/40 y 1/80, etc.). Por ejemplo: tomar 100μL de la dilución 1/5, mezclar con 100μL de PBS para obteneruna dilución 1/10. Repetir la operación para otras diluciones.3. Portaobjetos de sustrato. Dejar que los portaobjetos de sustrato alcancen la temperatura ambiente (18-28°C)antes de retirarlos de las bolsas.Etiquetar los portaobjetos adecuadamente. Colocarlos en la cámara húmeda y añadir 50-100μL de los controlespositivos y negativos a los pocillos correspondientes. Añadir 50-100μL de muestras de paciente diluidas a lospocillos restantes.4. Incubación de portaobjetos. Incubar los portaobjetos durante 30 minutos en una cámara húmeda a temperaturaambiente (18-28°C).5. Lavado con PBS. Retirar los portaobjetos de la cámara húmeda y aclararlos brevemente con un frascocomprimible de PBS. No dirigir directamente el chorro a los pocillos. Colocar los portaobjetos en una bandeja,sumergirlos en PBS y agitar durante 5-10 minutos.6. Adición de conjugado fluorescente. Eliminar el exceso de PBS y secar con material absorbente el contorno delos pocillos. Volver a colocar los portaobjetos en la cámara húmeda y cubrir inmediatamente cada pocillo conuna gota de conjugado fluorescente adecuadamente diluido. NO DEJAR LOS POCILLOS DESCUBIERTOSDURANTE MÁS DE 15 SEGUNDOS. El secado del sustrato afecta negativamente a los resultados. Lautilización de conjugado adsorbido de mono permitirá obtener mejores resultados (p.ej. 504011).7. Incubación de portaobjetos. Incubar los portaobjetos durante 30 minutos en una cámara húmeda y oscura atemperatura ambiente (18-28°C).8. Lavado con PBS. Volver a lavar, tal como se describe en el paso 5. CONTRATINCIÓN OPCIONAL: añadir 2-3gotas de azul de Evans al 1% por cada 100mL de PBS antes de proceder a la inmersión de los portaobjetos.9. Montaje con cubreobjetos. Retirar uno a uno los portaobjetos de la solución PBS de lavado. Secar rápidamenteel contorno de los pocillos y añadir una gota de medio de montaje a cada pocillo. Colocar con cuidado elportaobjetos en el cubreobjetos, evitando que se formen burbujas de aire. No intentar eliminar las burbujas quese hayan podido formar. Eliminar el exceso de medio de montaje del borde del cubreobjetos.10. Examen de portaobjetos en el microscopio de fluorescencia. Los portaobjetos pueden almacenarse un máximode 3 días a 2-8°C, en un lugar oscuro, sin que se produzca una pérdida de fluorescencia significativa.2