Comparaison de trois méthodes pour la détection de Mycoplasma et ...

Image 4 : Photo du fonctionnement de l’appareil à PCR
Photo 5 : Agrandissement du système du rotor pour la PCR en temps réel
Il faut savoir, que l'échantillon est traité avant d'être utilisé pour la PCR temps réel. En
effet, chaque prélèvement biologique doit subir une extraction d'ADN ou d'ARN.
4.2.2 Extraction de l'ADN
Pour l'extraction d'ADN nous avons utilisé l'automate EZ1 BioRobot de QIAGEN. La
technique des particules magnétiques donne à l'ADN une haute qualité. Elle est utile pour
une utilisation directe d'amplification ou autre application enzymatique.
Le rendement dépend de la souche de bactéries, de la densité, du volume d'échantillon et
du volume d'élution.
L'extraction dure 15 minutes. Le tampon ainsi que la protéinase K vont permettre de
détruire la structure de l'ADN afin d'éliminer les protéines et de libérer les acides
nucléiques. Quand cette étape est terminée, les acides nucléiques sont capturés pas les
particules magnétiques qui vont être lavées à plusieurs reprises. Lors de l'élution, l'éluât
se détache des billes et celles-ci sont capturées par un système d'aimantation qui les
retient. 3
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