Comparaison de trois méthodes pour la détection de Mycoplasma et ...

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Sommaire Mycoplasma et Ureaplasma sont des procaryotes plus communément appelés mycoplasmes. Ce sont des bactéries dépourvues de paroi, ce qui les rend non colorables au Gram. Les mycoplasmes sont principalement à l'origine d'urétrites, de salpingites, mais sont aussi dangereux pour le fœtus car ils peuvent provoquer des méningites voire la mort du bébé. Les mécanismes pathologiques de ces organismes sont encore mal connus, c'est pour cela qu'il faut les détecter rapidement. Les mycoplasmes, grâce à la variation de la structure et de l'expression de leurs protéines de surface, peuvent s'adapter facilement à leur environnement. Il existe plusieurs genres de la famille des Mycoplasmataceae. Il y a les Mycoplasma pneumoniae, génitalium et hominis ainsi que les Ureaplasma urealyticum et parvum. Dans ce travail, nous allons nous intéresser à Mycoplasma hominis et Ureaplasma urealyticum. Le but de cette étude est de comparer trois méthodes pour la détection de Mycoplasma et Ureaplasma dans les frottis vaginaux et dans les urines. Ces méthodes sont :la culture, la PCR en temps réel et le kit Mycoplasma DUO. Summary Mycoplasma and Ureaplamsa are prokaryotes more commonly called mycoplasmas. They are bacteria without any cell wall, that’s the reason why they are not colorable by the Gram method. The mycoplasmas are coming from urethritis, salpingit, but are dangerous for the fetus too, because they can cause meningitids or death of the baby. The pathological mechanisms of these organisms are still poorly known, that’s why they must be detected quickly. The mycoplasmas, due to the change in structure and expression of their surface proteins, can easily be adapted to their environment. There exist several species in the family of Mycoplasmataceae. There are Mycoplasma pneumoniae, genitalium and hominis, Ureaplasma urealyticum and parvum too. In this work, we mainly focus on Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum. The purpose of this study is to compare three methods for the detection of Mycoplasma and Ureaplasma in vaginal smears and urine. These methods are: culture, real-time PCR and Mycoplasma Duo kit. 1
Table des matières 1. Introduction ...................................................................................................................... 4 1.1 Mycoplasma hominis .................................................................................................... 4 1.1.1 Histoire ................................................................................................................ 4 1.1.2 Caractéristiques, morphologie ............................................................................. 4 1.1.3 Habitat et mode de transmission ......................................................................... 4 1.1.4 Pathogénicité ...................................................................................................... 4 1.1.5 Traitement et prophylaxie .................................................................................... 5 1.2 Ureaplasma .................................................................................................................. 5 1.2.1 Caractéristiques, morphologie ............................................................................. 5 1.2.2 Habitat et mode de transmission ......................................................................... 6 1.2.3 Pathogénicité ...................................................................................................... 6 1.2.4 Traitement et prophylaxie .................................................................................... 6 2. Objectif de l’étude ............................................................................................................ 6 3. Matériels ........................................................................................................................... 7 4. Méthodes .......................................................................................................................... 7 4.1 Culture .......................................................................................................................... 7 4.1.1 Généralité ........................................................................................................... 7 4.1.2 Matériels ............................................................................................................. 7 4.1.3 Préparation des échantillons ............................................................................... 7 4.1.4 Interprétation des résultats .................................................................................. 8 4.2 PCR en temps réel ....................................................................................................... 8 4.2.1 Généralité ........................................................................................................... 8 4.2.2 Extraction de l’ADN ............................................................................................. 9 4.2.3 Matériel ............................................................................................................. 10 4.2.4 Protocole ........................................................................................................... 10 4.2.5 Etape de la PCR ............................................................................................... 11 4.2.6 Matériel ............................................................................................................. 12 4.2.7 Protocole ........................................................................................................... 13 4.2.8 Préparation des échantillons ............................................................................. 13 4.2.9 Interprétation des résultats ................................................................................ 14 4.3 Culture ........................................................................................................................ 16 4.3.1 Généralité ......................................................................................................... 16 4.3.2 Principe ............................................................................................................. 16 4.3.3 Matériel ............................................................................................................. 17 4.3.4 Préparation des échantillons ............................................................................. 17 4.3.5 Protocole ........................................................................................................... 17 4.3.6 Interprétation des résultats ................................................................................ 17 2
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