Comparaison de trois méthodes pour la détection de Mycoplasma et ...

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4.3.3 Matériel Kit Mycoplasma DUO Etuve à 37 °C Echantillons 4.3.4 Préparation des échantillons Centrifuger les urines 5 min à 1500 rpm 7 4.3.5 Protocole Avec la bouteille compte gouttes, distribuer 4 gouttes dans les 3 cupules du bas : U ≥10 4 , D, H ≥10 4 . 7 Mettre le culot d’urine dans le milieu de suspension et distribuer à l’aide d’une micropipette 4 gouttes dans les cupules du haut : U, X, H, et une goutte dans la cupule D. 7 Avec une autre micropipette, bien homogénéiser le contenu de la cupule D et distribuer respectivement 1 goutte dans la cupule U ≥10 4 et H ≥10 4 . 7 Recouvrir la microplaque avec un film adhésif. Incuber 24h à 37 °C, puis prolonger de 24h si nécessaire. 7 4.3.6 Interprétation des résultats La première lecture après 24h est définitive dans le cas des titres forts. La deuxième lecture à 48h permet de confirmer les négatifs, de révéler les titres faibles ou de révéler les souches à titre fort avec un métabolisme lent. 7 Négatif : Absence de changement de couleur Positif à Ureaplasma : Virage de(s) cupule(s) U uniquement Positif à Mycoplasma : Virage de(s) cupule(s) H uniquement Positif aux deux : Virage de(s) cupule(s) U et H. 17
5. Résultats 5.1 UREAPLASMA Echantillons Culture PCR en temps réel Kit Mycoplasma DUO 1 Frottis vaginal Négative Négative ------------------------- 2 Frottis vaginal Négative Négative ------------------------- 3 Frottis vaginal Ureaplasma + 10 4 Positive 7038 copies ------------------------- 19 Frottis vaginal Négative Négative ------------------------- 20 Frottis vaginal Ureaplasma +++ >10 4 Positive 1343 copies ------------------------- 21 Urines Négative Négative Négative 22 Frottis vaginal Ureaplasma ++
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