Comparaison de trois méthodes pour la détection de Mycoplasma et ...

Ceci nous permettra de confirmer ou d'infirmer la qualité de la méthode utilisée
actuellement. La spécificité, la sensibilité, la durée et le coût des analyses seront
comparés tout au long de ce travail. Pour ce faire, nous avons choisi de travailler avec 25
échantillons pour Mycoplasma et 30 échantillons pour Ureaplasma. Parmi ces
échantillons, il y a des urines natives et des frottis vaginaux.
3. Matériels
1. Echantillons provenant de FutureLab. Utilisés directement pour la mise en culture
ainsi que pour l’utilisation du Kit Mycoplasma DUO. Congelés dans une solution de
conservation avant l’utilisation pour la PCR en temps.
2. Plaques Myco A7 pour la mise en culture. Fabriquant : Biomérieux. N°lot :
1000166580. Date d’expiration : 30.03.2011. La composition sera décrite cidessous.
3. Kit et appareil pour l’extraction d’ADN, ainsi que le kit et l’automate pour
l’amplification des échantillons. Pour Uréaplasme : Fabriquant : E.coli s.r.o
Studenohorsda. N°lot : 26.09.10 Date d’expiration : 16.03.2011. Pour Mycoplasme :
Fabriquant : E.coli s.r.o Studenohorsda. N°lot : 20.11.10. Date d’expiration :
08.09.2011.
4. Kit Mycoplasma DUO qui sera décrit au point 4.3. Fabriquant : BIORAD.
N°lot : 0J3192. Date d’expiration : 15.08.2011
4.1 CULTURE
4. Méthodes
4.1.1 Généralité
La culture se fait sur Gélose A7 Mycoplasma. C'est une gélose sélective qui a une base
nutritive contenant des peptones, du sérum de cheval et des facteurs de croissance qui
favorisent le développement des mycoplasmes (Cystéine, PolyVite X, Arginine, Urée). Elle
possède aussi des antibiotiques qui inhibent la croissance des bactéries Gram+ et Gram-,
ainsi que certaines levures. 7
4.1.2 Matériels
Gélose A7 Mycoplasma mise à température ambiante
Ecouvillons
Etuve anaérobie
Echantillons 7
4.1.3 Préparation des échantillons
Pour les urines, il faut mélanger les vacutainers ou l'urine mi-jet, ensuite imbiber
l'écouvillon et ensemencer la gélose en passant dans trois sens différents. Mettre la
gélose en anaérobiose à 37 °C pendant 48h.
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