Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

III-2-6-2 Activité PLD PIP2 sensible......................................................................... 104
III-2-7 Analyse de la composition en acides gras des phospholipides totaux de
thymocytes et des triglycérides et phospholipides plasmatiques par chromatographie en
phase gazeuse (CPG) ..................................................................................................... 105
III-2-8 Etude des microdomaines................................................................................... 106
III-2-8-1 Isolement des microdomaines à partir des thymocytes de rat..................... 106
III-2-8-2 Dosage du ganglioside GM1 et du PIP2 dans les fractions des gradients... 107
III-2-8-3 Dosage du cholestérol ................................................................................. 108
III-2-8-4 Dosage des phospholipides ......................................................................... 109
III-2-8-5 Dosage des protéines................................................................................... 109
III-2-8-5-1 Dosage des protéines par la méthode de Bradford (1976)................... 109
III-2-8-5-2 Dosage des protéines par la méthode Schaffner–Weissmann (1973).. 109
III-2-9 Electrophorèse en SDS-PAGE et "Western-blotting" : ...................................... 110
III-2-9-1 Préparation des échantillon : ....................................................................... 110
III-2-9-2 Précipitation des protéines par l’acétone à froid : ....................................... 110
II-2-9-3 Electrophorèse en SDS-PAGE : ................................................................... 110
III-2-10 Transcription inverse et Réaction en chaîne de la polymérase........................ 111
III-2-10-1 Préparation des ARN................................................................................. 111
III-2-10-2 Transcription inverse (RT)........................................................................ 112
III-2-10-3 Réaction en chaîne de la polymérase (PCR) ............................................. 112
III-2-10-4 Electrophorèse sur gel d'agarose des ADN ............................................... 114
III-2-11 Analyses statistiques des résultats.................................................................... 114
IV- RESULTATS ................................................................................................................. 115
IV-1 EFFET DES ACIDES GRAS «IN VITRO» SUR LES FONCTIONS IMMUNES........................... 115
IV-1-1 Effet des acides gras « in vitro » sur la réponse proliférative des thymocytes de
rat. .................................................................................................................................. 115
IV-1-2 Effet des AGI « in vitro » sur l’activité PLD des thymocytes de rat................... 118
IV-1-2-1 Caractérisation de la PLD des thymocytes de rat ....................................... 119
IV-1-2-2 Effet des acides gras «in vitro» sur l’activité PLD ..................................... 123
IV-1-3 Caractérisation des DRMs dans les thymocytes de rat ...................................... 129
IV-1-3-1 Détection du ganglioside GM1 ................................................................... 130
IV-1-3-2 Détection du PIP2 ....................................................................................... 131
IV-1-3-3 Dosage du cholestérol et des phospholipides.............................................. 132
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