ANNALES MASTERS 1 MAI 2006 / 2007

Documents pour le sujet de TD (N. Touche)Figure 1 : Des cellules nerveuses (H19-7) del’hippocampe exprimant HIP-1 (HIP-1 ou H) ontété transfectées par l’ADNc de HIP-1, et laviabilité des cellules est mesurée. Ces cellules ontensuite été traitées ou non avec 1µM destaurosporine (STS ou S) ou d’étoposide (ETOou E) et la viabilité cellulaire a été mesurée.La staurosporine, un inhibiteur des protéineskinases, est un inducteur de l’apoptose médiéepar les mitochondries. L’étoposide, utilisécomme anticancéreux, est également uninducteur de l’apoptose via les mitochondries.Figure 2 : Dans cette expérience les cellulesont été transfectées soit avec un plasmidecontenant l’ADNc de HIP-1 seul soit cotransfectéesavec un plasmide contenantl’ADNc de la protéine Htt normale (wHT). Laviabilité des cellules est évaluée aprèstransfection ou co-transfection.(Mock : contrôle non transfecté)Figure 3 : Les cellules ont été transfectées ou non(con) avec un plasmide contenant l’ADNc de HIP-1puis ont été traitées ou non avec ETO pendant3heures. L’activité de la caspase est mesurée.Figure 4 : Dans le cas de l’apoptoseintrinsèque il y a perte de l’intégrité desmembranes mitochondriales ce qui entraîne lalibération dans le cytosol de facteurs proapoptotiques : le cytochrome c et AIF. Dansl’expérience les cellules sont transfectées avecun plasmide contenant l’ADNc de HIP-1, puissont traitées ou non avec STS. Aprèsfragmentation cellulaire et séparation lesfractions cytosoliques sont analysées parwestern blotting avec des anticorps anti cytochrome c ou anti AIF.