Rapporto annuale 2004 - Istituto di Ricerche Farmacologiche Mario ...

IRFMN
Studio dell’espressione di PRL-3 in tumori ovarici
PRL-3 è una fosfatasi appartenente alla famiglia delle PRL che è stata recentemente descritta
come proteina sovraespressa, in pazienti con tumore del colon, nelle metastasi rispetto al tumore
primario di origine. Abbiamo studiato l’espressione di questo gene a livello di RNA in pazienti
con tumore ovarico di stadio III e in metastasi derivate da esso, per valutare se anche nel tumore
dell’ovaio si osservava lo stesso fenomeno. L’analisi ha mostrato che non ci sono significative
differenze di espressione tra tumore primario e metastasi ma, a differenza di quanto visto nel
tumore del colon, il tumore primario dell’ovaio esprime livelli relativamente alti di questa
fosfatasi. Abbiamo quindi esteso lo studio a tumori a stadio più precoce (stadio I) trovando che i
tumori allo stadio III esprimono livelli di PRL-3 maggiori rispetto al tumore allo stadio I
suggerendo che questa fosfatasi, nel tumore dell’ovaio, potrebbe essere associata con la
progressione tumorale più che con la metastatizzazione.
Inibizione del segnale mediato da PI3K/Akt
In cellule di carcinoma ovarico il gene PI3K è spesso overespresso o mutato e come risultato
questa chinasi risulta costitutivamente attivata. La conseguenza è la presenza di proteine che
determinano sopravvivenza cellulare, come Akt, costitutivamente fosforilate e quindi attive. In
questo progetto è stata valutata la capacità di inositoli tetra e pentafosfati di inibire il
reclutamento di Akt in membrana e la sua successiva fosforilazione. IP5 si è dimostrato in grado
di indurre riduzione della fosforilazione di akt e, come conseguenza, di indurre riduzione della
crescita cellulare. Inoltre la combinazione di IP5 con un farmaco antitumorale come cisplatino o
taxolo si è mostrata più attiva delle singole molecole nell’indurre apoptosi. Gli inositoli penta
fosfati potrebbero quindi rappresentare un ottimo modello per la sintesi di molecole in grado di
revertire il fenotipo antiapoptotico indotto dalla fosforilazione costitutiva di Akt.
Oncosoppressori p53 a p73
L’analogo di p53, p73, è noto essere presente in diverse isoforme, derivanti da splicing
alternativi a carico della parte c-terminale. Oltre a queste isoforme, ne esiste una, chiamata
DNp73, che manca invece del dominio di transattivazione situato nella parte N-terminale della
proteina. Questa forma DN di p73 ha funzioni antagonizzanti quelle di p53 e p73.
Sono stati ulteriormente caratterizzati cloni cellulari derivati dalla linea di carcinoma del colon
umano HCT116 esprimenti dopo induzione la forma DN di p73. Questi cloni, nonostante
esprimano alti livelli di DNp73 che antagonizzano le funzioni delle proteine p53 e p73 wildtype,
rispondono al trattamento chemioterapico in maniera analoga alle cellule non esprimenti
DNp73. Inoltre le stesse cellule trapiantate in topi nudi sono in grado di sviluppare tumori che
crescono in maniera analoga ai cloni non indotti o non esprimenti DNp73. Abbiamo dimostrato
che anche in vivo i tumori esprimono e mantengono alti livelli di questa forma aberrante di p73,
sia mediante tecniche di biologia molecolare che attraverso l’uso di tecniche di
immunoistochimica. I tumori che crescono nell’animale da esperimento rispondono inoltre al
trattamento con farmaci antitumorali esattamente come la linea parentale da cui sono stati
derivati. Sono in corso esperimenti atti a valutare gli effetti della sovraespressione di questa
forma aberrante di p73 in cellule HCT116 in cui il gene codificante per p53 è stato inattivato,
per verificare se l’impatto dell’espressione di DNp73 in cellule senza p53 (situazione che si
riscontra nella maggior parte dei tumori umani) è diverso.
Meccanismo di azione di nuovi farmaci antitumorali
E’ stato dimostrato negli anni precedenti dal nostro laboratorio che il farmaco antitumorale
brostallicina, un derivato della distamicina che lega il DNA nel suo solco minore, presenta un
meccanismo di azione peculiare, in quanto esercita una maggiore attività quando sono presenti
alti livelli del sistema glutatione (GSH) glutatione-S-transferase (GST). In diversi tumori umani
i livelli di questi enzimi detossificanti sono più elevati rispetto al tessuto normale da cui
25
RAPPORTO ATTIVITA’ 2004