4. Lipidi

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Reazione all’acido p-toluensulfonico Ha i seguenti vantaggi rispetto alla reazione di Liebermann-Burchard: i reagenti sono più stabili, il colore del prodotto di reazione non si modifica nel tempo, il colore sviluppato dal colesterolo libero e quello sviluppato dal colesterolo esterificato hanno la medesima intensità. Tuttavia in questo caso la bilirubina interferisce notevolmente nella determinazione del colesterolo dando luogo spesso ad una sovrastima dell’analita.
METODO ENZIMATICO La determinazione enzimatica del colesterolo prevede 1) l’idrolisi del colesterolo esterificato, 2) l’ossidazione del colesterolo libero a colest-4-en-3-one a spese dell’ossigeno atmosferico con produzione di perossido di idrogeno 3) e il dosaggio di quest’ultimo composto mediante reazioni enzimatiche e/o colorimetriche. Questo metodo presenta il vantaggio di un’elevata specificità per cui la reazione può essere seguita direttamente nel siero. Il principale problema risiede nel fatto che l’idrolisi degli esteri del colesterolo è spesso solo parziale e che quindi la concentrazione del colesterolo totale può essere sottostimata. Si è visto inoltre che il grado di idrolisi raggiungibile nel corso della reazione enzimatica dipende sia dalla natura dell’acido organico esterificante (gli esteri dell’acido arachidonico e dell’acido acetico sono particolarmente resistenti all’azione delle esterasi) sia dal tipo di enzima usato (le esterasi di origine microbica hanno maggiore difficoltà, rispetto alle esterasi di origine animale, ad idrolizzare gli esteri del colesterolo con acidi grassi polinsaturi a catena lunga). Ciò pone seri problemi all’affidabilità del metodo.
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