4. Lipidi

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Metodi di determinazione I metodi più frequentemente usati nella determinazione del HDL-colesterolo si basano sulla precipitazione selettiva delle VLDL e delle LDL e sul dosaggio del colesterolo sul supernatante così ottenuto. Gli agenti precipitanti maggiormente usati sono l’eparina-cloruro di manganese, il destrano solfato-cloruro di calcio o magnesio e il fosfotungstato di sodio. Il metodo basato sull’uso dell’eparina-cloruro di manganese non è con gran parte dei metodi enzimatici utilizzati per la determinazione del colesterolo mentre può essere accoppiato alla reazione di Liebermann-Buchard. Le VLDL e le LDL precipitano solo parzialmente in campioni con un contenuto di trigliceridi superiore a 4 g/L. La precipitazione delle lipoproteine con destrano solfato e sali di calcio o magnesio permette un successivo dosaggio del colesterolo mediante il metodo enzimatico. Tuttavia molte delle procedure utilizzanti il destrano tendono a sottostimare l’HDLcolesterolo. Anche il metodo utilizzante il fosfotungstato di sodio sottostima l’HDL-colesterolo, ma in misura minore rispetto al metodo utilizzante il destrano. Esso è particolarmente utile per precipitare le VLDL e le LDL in sieri ipertrigliceridemici. Il suo principale svantaggio è di essere molto sensibile a variazioni di temperatura o di concentrazione dei reagenti.
L’LDL-colesterolo è ricavato indirettamente utilizzando i dati (espressi in mg/L) del colesterolo totale, dell’HDL-colesterolo e dei trigliceridi mediante la formula: [LDL-colesterolo] = [colesterolo totale] – [HDL-colesterlo] – [trigliceridi] x 0,2 La formula presuppone che la maggior parte dei trigliceridi si trovi nelle VLDL e che vi sia un rapporto di 5:1 tra trigliceridi e colesterolo nella frazione VLDL. Per questa ragione la formula non è valida nei soggetti con dislipidemia tipo III o con trigliceridemia superiore a 4 g/L. In alternativa, l’LDL-colesterolo può essere determinato direttamente utilizzando in sequenza due detergenti, in modo da dissolvere, in un primo momento, tutte le lipoproteine diverse dalle LDL (chilomicroni, VLDL, IDL, HDL) e, in un secondo momento, le sole LDL. Il colesterolo, che si libera per aggiunta dei detergenti, viene cimentato in presenza di una esterasi e una ossidasi specifica in modo da produrre perossido di idrogeno. Il perossido di idrogeno, prodotto dal colesterolo liberato per aggiunta del primo detergente, è decomposto mediante una catalasi o fatto reagire con 4aminoantipirina in presenza di una perossidasi in modo da formare un prodotto di reazione incolore. Il perossido di idrogeno, prodotto dal colesterolo liberatosi dalle LDL dopo l’aggiunta del secondo detergente, è fatto invece reagire con un cromogeno in presenza di perossidasi e il prodotto di reazione è dosato spettrofotometricamente
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