UNIVERSITA DEGLI STUDI DELLA TUSCIA DI VITERBO ...

Materiali e metodi
ml, e conservato in frigo; al residuo polposo vengono aggiunti 2 ml di acqua
bidistillata e viene ripetuta la procedura di estrazione. I surnatanti recuperati dalle
due estrazioni vengono riuniti, viene misurato il volume totale e l’estratto viene
aliquotato in contenitori da 2 ml, nuovamente centrifugato a 10000 rpm per 5
minuti (al fine di allontanare eventuali particelle solide) e trasferito in contenitori
da 1.5 ml per l’analisi. Per l’estrazione della frazione liposolubile, il residuo
polposo viene sottoposto a due ulteriori estrazioni: prima con 4 ml e poi con 2 ml
di acetone, procedendo come nell’estrazione dei composti idrosolubili. Anche in
questo caso, l’estratto acetonico viene riunito e trasferito in contenitori per essere
analizzato. Questo metodo estrattivo è valido sia per l’analisi TRAP che FRAP
successivamente descritte.
3.2.2 Misura del Potere Antiossidante Totale (TRAP Total Radical-trapping
Antioxidant Paramiter)
Il metodo TRAP rappresenta una valida misura della capacità antiossidante totale
(TAC). La TAC di una soluzione, sia pura che eterogenea, può essere definita
come la capacità di resistere ad una reazione di perossidazione artificialmente
indotta e strettamente controllata; è un parametro che tiene conto delle
concentrazioni delle sostanze antiossidanti presenti e delle loro sinergie.
Il metodo (14) sfrutta le caratteristiche di una molecola fluorescente, la R-
ficoeritrina (R-PE), estratta dalle alghe rosse, la cui peculiarità è quella di perdere
la caratteristica fluorescenza in seguito a reazione con agenti ossidanti (88). Essa
rappresenta quindi (a concentrazioni estremamente basse, 1 x 10 -8 M), il
rivelatore di un flusso di radicali perossilici provocati tramite decomposizione
termica di un azocomposto, il 2,2-azobis-(2-amidinopropano) diidrocloride
(ABAP). Qualsiasi sostanza antiossidante che ostacoli il flusso di radicali
perossilici sulla R-PE provocherà un ritardo nel suo decadimento (Fase di
Inibizione, FI) proporzionale alla sua concentrazione ed alla sua attività
antiossidante. Rappresentando in un grafico la curva di decadimento della R-PE,
la lunghezza della FI del campione in esame viene calcolata estrapolando ed
intersecando la pendenza di massima perossidazione con la pendenza di inibizione
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