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Screen ed ELISA Negativo devono essere inclusi ogni volta che si esegue il test per assicurare chetutti i reagenti ed il test funzionino in modo corretto.2. Si deve notare che poichè i Controlli ELISA debolmente positivo Celiac DGP Screen, ELISAfortemente positivo Celiac DGP Screen II ed ELISA Negativo sono prediluiti, essi non rappresentanoun controllo procedurale per le tecniche di diluizione utilizzate per i campioni.3. Ulteriori controlli possono essere inclusi in base alle indicazioni o alle richieste delle vigentiregolamentazioni o delle organizzazioni di accreditamento. Ulteriori sieri di controllo possono esserepreparati raccogliendo in un pool dei sieri umani, aliquotandolo e conservandolo a < -20°C.4. Perchè i risultati del test siano considerati validi, tutti i seguenti criteri devono essere soddisfatti. Seanche uno solo non rientra nei valori specificati, i risultati non dovrebbero essere considerati validi edil test dovrebbe essere ripetuto.a. L’assorbanza del Controllo ELISA fortemente positivo Celiac DGP Screen prediluito deveessere maggiore di quella del Controllo ELISA debolmente positivo Celiac DGP Screenprediluito che a sua volta deve essere maggiore di quella del Controllo ELISA Negativoprediluito.b. Il Controllo ELISA fortemente positivo Celiac DGP Screen prediluito deve avereun’assorbanza maggiore di 1,0 mentre l’assorbanza del Controllo ELISA Negativo prediluitonon deve essere maggiore di 0,2.c. L’assorbanza del Controllo ELISA debolmente positivo Celiac DGP Screen deve esseremaggiore di due volte rispetto a quella del Controllo ELISA Negativo oppure > 0,25.d. Il Controllo ELISA Negativo ed il Controllo ELISA fortemente positivo Celiac DGP Screenservono per controllare un’eventuale malfunzionamento dei reagenti. Il Controllo ELISAfortemente positivo Celiac DGP Screen non assicura la precisione in corrispondenza delvalore soglia del test.e. L’utente del test dovrebbe fare riferimento al Documento C24-A2 dell’ CSLI (NCCLS) perulteriori informazioni su appropriate tecniche di Controllo di Qualità. 19Calcolo dei risultatiSi deve determinare innanzitutto il valore medio di assorbanza per ciascun set di duplicati. La reattività diciascun campione viene quindi calcolata dividendo il valore medio di assorbanza del campione per il valoremedio di assorbanza del Controllo ELISA debolmente positivo Celiac DGP Screen e moltiplicando il risultatoper il numero di unità assegnate al Controllo ELISA debolmente positivo Celiac DGP Screen, che è stampatosull’etichetta del flacone.Assorbanza campioneValore del campione = ——————————— x Valore Controllo ELISA debolmente positivo(unità) Assorbanza Controllo ELISA debolmente positivo Celiac DGP Screen Celiac DGP Screen (unità)La reattività è collegata in modo non lineare alla quantità di anticorpi presente. Mentre gli aumenti e lediminuzioni delle concentrazioni degli anticorpi vengono evidenziate da un corrispondente aumento odiminuzione della reattività, il cambiamento non è proporzionale (ad es., un raddoppio della concentrazionedi anticorpi non raddoppia necessariamente la reattività). Se si desidera una più accurata quantificazione delcontenuto di anticorpi, si possono allestire e testare diluizioni seriate del campione.Interpretazione dei risultatiIl metodo ELISA è molto sensibile alla procedura ed è in grado di individuare anche piccole differenze nellapopolazione dei pazienti. I valori riportati qui di seguito sono solo valori suggeriti. Ciascun Laboratoriodovrebbe stabilire il proprio range di normalità basato sulla procedura da esso utilizzata, sui controlli,sull’apparecchiatura e sulla popolazione di pazienti secondo le proprie metodiche standard.Il campione può essere quindi classificato come negativo, debolmente positivo, moderatamente o fortementepositivo in base alla seguente tabella.UnitàNegativo 301. Un risultato positivo indica la presenza di anticorpi anti-gliadina della classe IgA e/o IgG e suggeriscela possibilità della presenza di certe enteropatie sensibili al glutine quali la malattia celiaca e ladermatite erpetiforme.2. Un risultato negativo indica l’assenza di anticorpi anti-gliadina della classe IgA o IgG anticorpi oppurela loro presenza a livelli inferiori al limite di sensibilità del metodo.3. Sul referto si dovrebbe riportare la seguente frase: “I seguenti risultati sono stati ottenuti mediante iltest QUANTA Lite TM Celiac DGP Screen ELISA della INOVA. I valori Gliadin IgA e/o IgG ottenuti contest prodotti da altre Ditte possono non essere utilizzabili in modo intercambiabile. Il livello di anticorpideterminato con questo metodo non può essere correlato ad un titolo end-point.”Limitazioni del test1. Un risultato negativo in un paziente non trattato non esclude totalmente l’enteropatia glutinesensibile.I campioni negativi possono essere sottoposti ad altri test per altri anticorpi correlati allaceliachia come gli anticorpi anti-endomisio (EMA) o la transglutaminasi tissutale (tTG).2. Nei pazienti trattati che sono in grado di produrre anticorpi della classe IgA, i livelli di IgA anti-gliadinarappresentano un indicatore più attendibile dell’osservanza delle regole dietetiche rispetto alleconcentrazioni di IgG anti-gliadina. 53. Sono possibili falsi positivi (livelli di anticorpi elevati senza riscontri istologici caratteristici).4
Raramente altri disturbi gastrointestinali e campioni normali possono avere anticorpi che reagisconoall’antigene DGP.4. L’associazione tra dermatite erpetiforme ed enteropatia sensibile al glutine è così forte che è statosuggerito che entrambe le malattie abbiano la stessa eziologia; in questi pazienti, la determinazionedella presenza di DGP anticorpi anti-gliadina è utilie per individuare una malattia celiaca asintomaticae per valutare la gravità dell’interessamento gastrointestinale. 13,145. Questo test determina simultaneamente gli anticorpi IgA e IgG. Se si preferisce la determinazionesingola di anticorpi IgA o IgG specifici, INOVA offre a questo scopo kit ELISA separati per IgA e IgG(QUANTA Lite TM Gliadin IgA II e QUANTA Lite TM Gliadin IgG II).6. I risultati di questo test devono essere valutati dal medico curante alla luce del quadro clinico delpaziente e del risultato degli altri test sierologici.7. Le prestazioni caratteristiche del test non sono state valutate per campioni diversi dal siero.Valori attesiLa capacità di QUANTA Lite TM Celiac DGP Screen di rilevare la presenza di anticorpi IgG e IgA antigliadina èstata valutata mediante un confronto con metodiche ELISA QUANTA Lite TM Gliadin IgA II e QUANTA Lite TMGliadin IgG II.Range normaleQuattrocentonovantasette soggetti sani e asintomatici casuali e residenti negli USA sono stati sottoposti atest per determinare la presenza di anticorpi anti-DGP. Di questi, trecento donatori avevano un’età compresafra i 14 ed i 78 anni con una eguale distribuzione fra maschi e femmine. Quattro campioni (0,8%) erano al disopra del valore soglia di 20 unità. Due erano positivi deboli con valori pari a 20,1 e 20,2 unità e uno era unpositivo moderato con un valore pari a 46,6 unità. Il quarto positivo, con 25,4 unità, viene considerato unvero celiaco dato che il campione è risultato fortemente positivo anche per gli anticorpi IgA antitransglutaminasitissutale (57 unità). Il valore medio dei 497 campioni era di 3,17 unità. La deviazionestandard dei campioni era di 3,0 unità. Il valore medio è di sei deviazioni standard al di sotto del valore sogliadi 20 unità.Caratteristiche specifiche delle prestazioniConfronto con i predicate deviceCentouno campioni provenienti da tre laboratori di riferimento per la celiachia sono stati testati internamentesui test ELISA QUANTA Lite TM Celiac DGP Screen, QUANTA Lite TM Gliadin IgA II e QUANTA Lite TM GliadinIgG II. I risultati, assieme ai 497 campioni normali, sono illustrati di seguito.N= 598 Gliadin IgG II e/o Gliadin IgA IIPositivi NegativiCeliac DGP Screen Positivi 39 3*Negativi 11** 545Percentuale di accordo positivi: 39/50 (78,0%)Percentuale di accordo negativi: 545/548 (99,4%)Accordo generale: 548/598 (91,6%)*Dei 3 campioni risultati positivi al test Celiac DGP Screen ma negativi a entrambi i kit Gliadin II, 2 eranopazienti celiaci che seguivano una dieta priva di glutine con 28,7 e 20,9 unità. Il terzo paziente era unparente di primo grado di un paziente celiaco con 20,2 unità.**Degli undici campioni risultati negativi al kit Celiac DGP Screen ma positivi a un kit Gliadin II kit, 9provenivano dallo studio normale. I due restanti erano entrambi pazienti celiaci che seguivano una dietapriva di glutine. Uno ha dato 20,1 unità al test Gliadin IgG II e l’altro 25,3 unità al test Gliadin IgA II.Klinischen StudienI campioni clinicamente definiti come pazienti celiaci, pazienti celiaci con deficit di IgA, pazienti celiaci cheseguivano una dieta priva di glutine, parenti di primo grado di un paziente celiaco, pazienti con dermatiteherpetiforme, controlli con deficit di IgA oppure pazienti non celiaci sono stati sottoposti a test in studi clinicisia interni che esterni utilizzando il test QUANTA Lite TM Celiac DGP Screen. Di seguito sono riepilogati icampioni definiti clinicamente e 517 dei suddetti campioni compresi nell’intervallo di normalità.Gruppo pazienti # Posotivi Celiac DGP Screen %Celiaco 85 81 95,3%Con mancanza della IgA celiaca 50 50 100%Celiaco su dieta priva di glutine 33 9 27%Parenti di 1° grado 18 2* 11%La dermatite herpetiforme pazientis 65 59** 91%Con mancanza della IgA controllo 36 0 0%Non-celiaco malattia pazientis 91 1 1,2%Normali 517 4*** 0,8%*Uno dei parenti ha dato un risultato di 41,3 unità ed era positivo sia per h-tTG che per EMA. Il secondo hadato un risultato di 20,2 unità ed era negativo sia per h-tTG che per EMA.**In questo stesso gruppo di pazienti, solo 54 o l’83% erano h-tTG positivi e 6 di questi 65 individui nonpresentavano coinvolgimento intestinale (biopsia Marsh 0).5
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