Handboek - CLZ vaklokalen

Stel dat je het aantal herhalingen van locus TH01 op
chromosoom 11 van een verdachte wilt onderzoeken.
Om te weten waar het kopiëren moet beginnen en waar
het moet eindigen, moet je weten hoe de DNA-volgorde
er uit ziet van het DNA dat vlak voor en vlak na de
herhalingen in TH01 zit. Het aantal herhalingen in TH01
verschilt per persoon, maar de stukken die daar
omheen zitten, blijken bij iedereen identiek (Het is
gebleken dat 99,5 tot 99,9 % van het DNA van alle
mensen identiek is).
Schematisch zien de twee ketens van elk chromosoom
bij locus TH01 er uit als in figuur 25.
Figuur 25: locus TH01 op chromosoom 11
ATGATACTGACTGAC TCAT TCAT TCAT TCAT TCAT TCAT AGTCTACTAG
TACTATGACTGACTG AGTA AGTA AGTA AGTA AGTA AGTA TCAGATGATC
6 herhalingen op het ene chromosoom
ATGATACTGACTGAC TCAT TCAT TCAT TCAT TCAT TCAT TCAT TCAT AGTCTACTAG
TACTATGACTGACTG AGTA AGTA AGTA AGTA AGTA AGTA AGTA AGTA TCAGATGATC
8 herhalingen op het andere chromosoom
De flankerende stukken zijn op beide chromosomen (en zelfs bij alle mensen) gelijk!
Als je de code van de flankerende stukken weet, moet
je het beginstukje en het eindstukje (vlak voor en
achter de locus) door de PCR-leverancier laten maken.
Deze korte stukjes DNA van 15 bouwstenen, de
zogenaamde primers, passen precies op het begin en
eind van de locus die je wilt kopiëren.
Als je de primers toevoegt aan het DNA dat je
geïsoleerd hebt, plakken de primers precies voor en
achter de locus aan het DNA. Ze passen namelijk maar
op één plek. Dat komt doordat een T alleen tegenover
een A past en een G alleen tegenover een C.
De primers geven als een soort vlaggetjes aan waar de
locus begint en eindigt, zodat alleen de locus die tussen
de twee primers ligt, gekopieerd wordt. De primers
bepalen dus welke locus je kopieert.
Het kopiëren begint als je het enzym DNA-polymerase
en de DNA-bouwstenen (de nucleotiden A, C, G en T)
toevoegt. Alleen op de plaats waar een primer aan het
DNA geplakt zit, kan het enzym beginnen met kopiëren.
Het enzym DNA-polymerase plakt de juiste DNAbouwstenen
op de juiste plek, dus een A tegenover een
T en een C tegenover een G.