Handboek - CLZ vaklokalen

Stap 1: de twee strengen DNA
laten los bij 95 °C
Stap Stap 1: de 2: twee de primers strengen hechten DNA bij 55 °C precies
laten los bij op 95 de °C plaats waar ze passen
72 °C
Stap 2: de primers hechten bij 55 °C precies
op de plaats waar ze passen 95 °C
In figuur 26 Stap zie 1: je de twee de PCR-reactie strengen DNA in vier fases
afgebeeld. laten los bij 95 °C
• Stap 1. De locus die je wilt kopiëren bestaat uit
een dubbele streng nucleotiden (plaatje 1 van figuur
26).
72 °C • Stap 2. De twee strengen laten los als de
Stap 3: temperatuur boven 90 °C komt. Na afkoelen tot 55
Stap bij 72 4: aan °C verlengt het einde het van enzym de eerste DNAcyclus
heb je
polymerase twee identieke het DNA stukken vanaf de DNA. primers °C kunnen de primers vastplakken 72 op °C de plek waar
ze passen Stap (plaatje 4: aan het einde 2). van de eerste cyclus heb je
twee identieke stukken DNA.
• Stap 3. Bij 72 °C doet het enzym DNA-polymerase
vervolgens zijn werk en zet de juiste nucleotiden op
de juiste plek (plaatje 3).
Figuur 27: het PCR-apparaat
zorgt voor de juiste temperatuur
95 °C 55 °C
55 °C
72 °C
Stap 2: de primers hechten bij 55 °C precies
Stap op 3: de bij plaats 72 °C waar verlengt ze passen het enzym DNApolymerase
het DNA vanaf de primers
Figuur 26: PCR-reactie in vier
stappen
72 °C
95 °C
Stap 4: aan het einde van de eerste cyclus heb je
twee identieke stukken DNA.
72 °C
55 °C
Stap 3: bij 72 °C verlengt het enzym DNA-
Stap polymerase 2: de primers het DNA hechten vanaf bij de 55 primers °C precies
op de plaats waar ze passen
Figuur 26: PCR-reactie in vier
stappen
55 °C
72 °C
72 °C
Stap 4: aan het einde van de eerste cyclus heb je
twee identieke stukken DNA.
Stap 3: bij 72 °C verlengt het enzym DNApolymerase
het DNA vanaf de primers
• Stap 4. Het eindresultaat is 2 identieke stukken
DNA (plaatje 4).
Vervolgens begint de cyclus weer opnieuw: de
temperatuur wordt verhoogd tot 95°C en alle strengen
laten los. Nadat de primers gehecht zijn (bij 55°C) en
vanaf die plek het DNA weer verdubbeld is (bij 72°C)
heb je vier identieke stukken DNA, enzovoort…
Het PCR-apparaat is nodig om steeds de juiste
temperatuur voor het DNA en het enzym in te stellen.
Door de temperatuur te variëren kan de hele cyclus
(plaatje 1 t/m 4) meerdere keren achter elkaar
uitgevoerd worden. Na 25 cycli heb je genoeg kopieën
van de locus om te bepalen uit hoeveel herhalingen de
locus bestaat.