Handboek - CLZ vaklokalen

48. Opdrachten
48.1 PCR-filmpjes
Bekijk nu drie verschillende filmpjes over PCR via de
links ►URL7-9, zodat je het principe helemaal door
krijgt.
48.2 PCR techniek
a. Maak een lijst met benodigdheden (stoffen en
apparaten) die moet je hebben om een PCR uit te
kunnen voeren.
b. Wat zijn de twee redenen dat je de PCR-techniek
moet toepassen om een DNA-profiel te kunnen
maken?
8.6 Het bepalen van het aantal
herhalingen
In de tekst op pagina 7 van het NFI-rapport “De
Essenties van forensisch DNA-onderzoek-het DNAprofiel”
staat dat de DNA-analyse-apparatuur de DNAkenmerken
als pieken weergeeft. Maar hoe komt dit
piekenpatroon tot stand? Tot nu toe heb je geleerd hoe
de PCR-techniek van een locus één miljard kopieën kan
maken. Maar hoe bepaal je vervolgens het aantal
herhalingen van de loci in het DNA?
In handboek 5 heb je geleerd hoe chromatografie
werkt. Om te bepalen uit hoeveel herhalingen de locus
bestaat die je wilt onderzoeken, gebruik je ook een
chromatografietechniek.
Zodra de PCR-reactie voltooid is (30 cycli duren
ongeveer 3 uur), is het eindresultaat een klein buisje
met vloeistof. In die vloeistof zijn de miljarden stukjes
DNA, die tijdens de PCR-reactie zijn gemaakt, opgelost:
dit noemen we het PCR-product. Daaraan kun je met
het blote oog dus niets zien. Om te bepalen uit hoeveel
herhalingen de kopieën (en dus ook de originele locus)
bestaan, breng je deze vloeistof bovenop een heel
dunne chromatografiekolom.
Onder deze omstandigheden zijn de DNA-stukjes
negatief geladen. Om de DNA-stukjes door de kolom te
“trekken”, breng je over de kolom een spanning aan.
De negatieve pool sluit je boven aan en de positieve
pool beneden. De DNA-stukjes worden door de positieve
pool aangetrokken en bewegen dus door de kolom naar
beneden.
Aan het uiteinde van de chromatografiekolom
detecteert een laser of er DNA uit de kolom komt. Het
apparaat meet ook hoe lang de DNA stukjes er over
deden om door de kolom heen te stromen. Het
materiaal waarvan de kolom gemaakt is, zorgt ervoor