Biologia e Fisiologia Celular - UFPB Virtual - Universidade Federal ...

14
Biologia e Fisiologia Celular
a utilização de lâmpadas de mercúrio e xenônio. No entanto, ao invés da reflexão, ou absorção da
luz, pelo material biológico, a fluorescência é o fenômeno que dá suporte à microscopia que leva o
seu nome.
E o que vem a ser o fenômeno de fluorescência? Inicialmente descrito por George Gabriel
Stokes, no ano de 1852, ao estudar o mineral fluorita, a fluorescência é a propriedade que
algumas moléculas apresentam em absorver luz em um determinado comprimento de onda, e
emitir luz em outro comprimento de onda, menor do que o da luz absorvida, portanto, com menor
energia. Os compostos que detém essa propriedade são denominados fluorocromos ou
simplesmente compostos fluorescentes. Tais compostos apresentam um grupamento funcional,
denominado fluoróforo, que, de forma análoga aos cromóforos, são responsáveis pela absorção e
emissão da luz. A fluorescência é produzida quando um elétron absorve energia e salta para um
orbital mais externo. Ao retornar para o orbital original, o elétron libera energia na forma de um
fóton luminoso.
O microscópio de fluorescência utiliza filtros que selecionam o comprimento de onda que
irá excitar o corante (filtro de excitação) e o comprimento de onda que será visualizado pelo
observador (filtro de barreira). Uma vez que o fundo é escuro, a amostra fluorescente é facilmente
visualizada.
Existem dezenas de corantes fluorescentes utilizados em biologia celular para a análise de
diversos parâmetros celulares e moleculares, onde podemos citar: pH citosólico; conteúdo de
DNA; potencial de biomembranas; concentração intracelular de íons; transporte de moléculas;
entre outros. Uma técnica bastante utilizada na microscopia de fluorescência é a conjugação de
corantes fluorescentes, tais como o isotiocianato de fluoresceína (FlTC) ou a ficoeritrina, com
anticorpos direcionados para proteínas de superfície celular ou para proteínas intracelulares.
:: PERGUNTAS?? ::
O que é um anticorpo? Qual é a natureza química de um anticorpo? Como é
possível, tecnicamente, fazer com que um anticorpo se ligue a uma proteína
intracelular?