Biologia e Fisiologia Celular - UFPB Virtual - Universidade Federal ...

4.5. MICROSCOPIA CONFOCAL
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Biologia e Fisiologia Celular
A invenção do microscópio confocal foi um avanço espetacular no campo da microscopia,
uma vez que possibilitou uma série de conquistas sobre a microscopia óptica convencional, com
destaque para o controle da profundidade de campo, a eliminação, ou redução parcial, das
informações que se encontram fora do plano focal, e a coleta de uma série imagens seqüenciais
de planos seccionais. A partir do processamento destas imagens é possível a construção de uma
imagem tridimensional do espécime sob observação (figura 1.10).
Figura 1.10 – Visão frontal de uma larva plúteo
de Echinometra lucunter marcada com calceína-AM.
Para a construção da imagem tridimensional foram
realizadas 184 microfotografias em série. As
fotomicrografias foram obtidas 48 horas após a
fertilização. Fonte: Luis Fernando Marques-Santos
(DBM/UFPB) e Regina Célia Bressan Queiroz Figueiredo
(CPqAM/FIOCRUZ).
A microscopia confocal é a técnica de
microscopia óptica que mais tem contribuído para o entendimento dos processos biológicos ao
nível celular. Uma vez que a microscopia confocal também se baseia no uso de corantes vitais
(que não necessitam de fixadores ou agentes permeabilizantes para atravessarem a membrana
plasmática), que permitem o estudo de células vivas, diversos processos celulares antes pouco
compreendidos, tais como o tráfego intracelular de vesículas, podem, hoje, serem melhores
compreendidos, principalmente após o desenvolvimento das técnicas baseadas no uso da GFP. O
microscópio confocal utiliza, como fontes luminosas, os lasers de argônio ou hélio/neônio ou, mais
raramente, lâmpadas de mercúrio e xenônio (como os microscópios de fluorescência).
A figura 1.11 mostra duas imagens de óvulos de ouriço-do-mar da espécie Echinometra
lucunter marcados com o corante verde calceína-AM. A imagem obtida pela microscopia confocal
revela que a distribuição do corante ocorre apenas no córtex celular, ao contrário do que sugere a
imagem obtida pela microscopia de fluorescência. Esta diferença se deve ao fato da imagem em B
exibir apenas a fluorescência coletada em um único plano seccional da célula (plano focal), sem
interferência dos demais planos, o que não ocorre na imagem apresentada em A.
Figura 1.11 – Fotomicrografias de
fluorescência (A) e confocal (B) de óvulos de
ouriço-do-mar da espécie Echinometra
lucunter marcados com o corante calceína-
AM. Fonte: Luis Fernando Marques-Santos
(DBM/UFPB) e Regina Célia Bressan Queiroz
Figueiredo (CPqAM/FIOCRUZ).