(Eugenia dysenterica DC) com e sem casca - UFRJ

3.5.1- Método do sequestro do radical DPPH:
A medida da atividade sequestrante do radical DPPH ∙ foi realizada de acordo
com a metodologia descrita por Brand-Wilams, Cuvelier e Berset (1995), com
modificações. Tem por base a redução do radical estável 2,2-difenil-1-picril hidrazil
(DPPH ∙ ), que ao fixar o H ∙ (removido do antioxidante em estudo) leva a uma
diminuição da absorbância.
Procedimento do ensaio:
Inicialmente, preparou-se solução na concentração de 1,0 mg/ml contendo
amostra liofilizada (lotes CCC e CSC) diluída em metanol. A seguir, foram realizadas
novas diluições obtendo-se soluções com concentrações finais de 25, 50 e 500 μg/ml.
De cada diluição foi retirada uma alíquota de 2,5 ml, a qual foi transferida para cubeta
de quartzo, e adicionou-se 1,0 ml da solução de DPPH 0,1M.
Nos ensaios em branco, ao invés do DPPH, adicionou-se apenas 1,0 ml de
metanol às diluições nas mesmas concentrações das amostras e o controle negativo foi
preparado apenas com 1,0 ml do radical DPPH e 2,5 ml de metanol.
A leitura da absorbância foi realizada em espectrofotômetro Thermo Scientific
Evolution 60 (Madison, Wisconsin, USA) a 518 nm, no primeiro minuto e, de 5 em 5
minutos, durante um período de monitoramento de 30 minutos. O Trolox, análogo
hidrossolúvel da vitamina E, foi utilizado como controle positivo, em razão da sua
comprovada elevada capacidade antioxidante.
Todas as análises foram realizadas, em triplicata, e acompanhadas de um
controle (sem antioxidante). A capacidade de sequestrar radicais livres foi calculada
com base no decréscimo da absorbância observada e expressa como percentual de
inibição de oxidação do radical, conforme fórmula:
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