Anais do I Seminário do Projeto Temático - Escola de Engenharia ...

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Water and Wastewater (1995). Os resultados dessas análises foram utilizados para o cálculo
dos parâmetros cinéticos (K M e r máx ), pelo método do duplo recíproco.
As análises cromatográficas da composição do biogás (CH 4 e CO 2 ) foram feitas em um
Cromatógrafo GOW-MAC de coluna empacotada e detector de condutividade térmica. Além
disso, a produção do biogás foi monitorada pelo aumento da pressão interna nos frascos,
utilizando um sensor de pressão. A análise dos resultados de pressão e composição do biogás
segui Aquino et al. (2007) para o cálculo da AME (atividade metanogênica específica).
Biologia Molecular
A análise da variação da diversidade microbiana neste ensaio foi realizada ao final das
bateladas sendo que a microbiota pertencente aos domínios Bacteria e Archaea foi
caracterizada pelas pela técnica da eletroforese em gel de gradiente desnaturante (DGGE) de
fragmentos específicos dos genes 16S rRNA amplificados pela reação em cadeia da
polimerase (Muyzer et al., 1993). Para tanto, o DNA genômico foi extraído de acordo com
Griffths et. al. (2000) e adaptado às amostras estudadas. A concentração de DNA foi
determinada em NanoDrop ND2000 Spectrophotometer (Intas, Göttingen, Germany). Os
fragmentos dos genes 16S RNAr foram amplificados pela reação de PCR com os primers
específicos ao domínio Bacteria, 968GC-F e 1392-R (Nielsen et al., 1999) e ao domínio
Archaea, 1100GC-F e 1400R (Kudo et al., 1997). O DGGE foi feito segundo os
procedimentos descritos em Muyzer et al. (1993), em géis de acrilamida (16 cm x 16 cm x
1 mm) com gradiente desnaturante de uréia e formamida de 70-30%. A montagem dos géis e
a separação dos fragmentos de DNA foram realizadas em um sistema formador de gradiente
Modelo 475 (Bio-Rad). As amostras foram corridas por 16 horas / 60 0 C / 75 V em tampão
TAE 1X (tris-acetato 0,04 M; EDTA 0,001 M). Os géis foram corados com brometo de
etídeo, fotografados e analisados em fotodocumentador Eagle Eye TMIII (Stratagene)
acoplado a computador com Software Eagle Sight. Os géis foram analisados pelo programa
BioNumerics, versão 2.5, e os dendogramas, para ambos os domínios, foram comparados pelo
índice de similaridade de Pearson.
Resultados e Discussão
A atividade metanogênica específica (AME) obtida para todos os ensaios e o tempo
necessário para atingir a produção máxima de CH 4 (t máx ) está descrito na Tabela 3.
Tabela 3 – Atividade metanogênica específica e tempo para velocidade máxima na produção
de metano
Biorreator t máx (h) AME (mg CH 4·L·g SVT -1·h -1 )
R1 11,8 10,2
R2 11,0 9,68
R3 13,9 9,53
R4 12,1 9,01
R5 18,6 14,4
Os resultados apresentados pela Tabela 3 mostram que nos biorreatores R1 (controle)
a R4 (25 mg Cd 2+·L -1 ) os valores no tempo de produção máxima de metano e na AME se
mantiveram muito próximos, mostrando que a contaminação aguda da biomassa não inibiu a
produção de metano significativamente. No entanto, no biorreator R5 (100 mg Cd 2+·L -1 ) foi
observado um valor de t máx maior do que os demais reatores, típico de sistemas submetidos a
algum grau de inibição. Porém, é importante observar que no biorreator R5 a AME aumentou
significativamente quando comparado com os valores obtidos para os demais biorreatores
(aumento de 41,3%, quando comparado com R1) a despeito do efeito da inibição no t máx
observada. Este resultado mostra que a contaminação aguda pelo Cd 2+ tornou o sistema mais