Dissertação Tamara Bianca Horn - Unisc

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70% e invertidos manualmente por 25 vezes para homogeneização da amostra. Antes da
inoculação fez-se uma diluição de 10 -1 com solução salina peptonada 0,1% estéril em tubos
de ensaio colocando-se 9 mL desta solução e 1 mL da amostra. A solução formada foi
homogeneizada em vórtex por 10 segundos. Houve sempre o cuidado de flambar os tubos
de ensaio no Bico de Bunsen no momento de sua abertura e fechamento. Em seguida, foi
retirada com micropipetador automático uma alíquota de 1 mL e depositada sobre a placa
levantando o filme superior. Em seguida, abaixou-se o filme superior evitando a entrada de
bolhas de ar. Houve o cuidado para espalhar o conteúdo de maneira uniforme. Após a
gelificação do meio de cultura, as placas identificadas foram incubadas em estufa
microbiológica à 35º C ± 1º C por 48 h ± 2h (Figura 7).
Figura 7. Análises microbiológicas. A: capela de fluxo laminar usada para a inoculação das amostras. B:
incubação das amostras em placas Petrifilm 3M®.
Fonte: Autora.
De acordo com o protocolo Petrifilm 3M®, a contagem de coliformes totais
corresponde ao total de colônias azuis e vermelhas associadas com gás em 24h de
incubação. As placas foram incubadas novamente por mais 24h para a detecção de novas
colônias azuis associadas com gás. O total de colônias azuis após 48 horas da incubação
foram consideradas E. coli (Figura 8).