QUANTA Lite® C1q CIC ELISA - inova

5. Adição de substrato (TMB)Pipetar 100µL de substrato (TMB) em cada poço, limpar o topo dos poços com papel absorvente de modoa remover qualquer salpico. Nota: Para evitar qualquer contaminação, não recolocar o excesso desubstrato (TMB) no frasco correspondente. Incubar, no escuro, à temperatura ambiente durante 30minutos.6. Paragem da reacçãoPipetar 100µL de solução de paragem em cada poço. Dá-se uma mudança de cor de azul para amarelo.7. Leitura da densidade ópticaLer a densidade óptica (DO) de cada poço a 450nm, num leitor de microplacas até 30 minutos após aparagem da reacção.Controlo de qualidade1. Controlo de qualidadePara que o teste seja válido, tem que obedecer aos seguintes critérios:• Os calibradores e controlos positivo e negativo devem estar incluídos em cada série.• Os valores obtidos para todos os controlos devem encontrar-se dentro do intervalo especificado peloCertificado de CQ.• A curva obtida deve ser similar à curva de calibração evidenciada no Certificado CQ.Caso os critérios acima referidos não sejam respeitados, o teste é considerado inválido e o testedeve ser repetido.2. Cálculo da média das densidades ópticas (somente para os ensaios realizados em duplicado)Para cada calibrador, controlo ou amostra calcular a média da DO das leituras em duplicado. Apercentagem do coeficiente de variação (%C.V.) para cada DO em duplicado deverá ser inferior a 15%.3. Curva de calibraçãoA curva de calibração pode ser traçada automaticamente ou manualmente, colocando a concentração deimunocomplexos em µg Eq/mL na escala logarítmica e as DO de cada calibrador na escala linear.• Automaticamente – utilizar um software adequado.• Manualmente – utilizar um papel log/linear, traçar a melhor curva através dos pontos obtidos, (nãotraçar uma linha recta, ou unir ponto por ponto).4. Tratamento de pontos anómalosCaso algum ponto se encontre fora da curva de calibração, este poderá ser retirado. A ausência destesignifica que a curva tem uma forma diferente da curva de calibração ou caso exista mais que um pontofora da curva, o teste deverá ser repetido.5. Cálculo dos valores CIC dos controlos e das amostrasDeterminar o nível dos imunocomplexos ligados nos controlos e nas amostras diluídas directamente apartir da curva de calibração. Os valores devem estar compreendidos entre o intervalo fornecido noCertificado do CQ. Nota: Os valores do calibrador foram ajustados por um factor de 100 para uma diluiçãode amostra de 1:101. Não é necessário mais nenhum tipo de correcção.6. Calibração do testeO teste é calibrado em µg Eq/mL por um calibrador de referência interno, cujos valores foram atribuídossegundo a preparação de referência da OMS para IgG humana agregada.Limitações do método1. Este kit é utilizado somente para diagnóstico. Um resultado positivo deve ser confirmado através de outrosdados clínicos e outros testes serológicos.2. Os resultados obtidos com este teste não constituem prova de diagnóstico da presença ou ausência dadoença.3. O soro poderá conter substâncias interferentes tais como agentes quelantes, ADN, autoanticorpos anti-C1q, factor reumatóide ou imunoglobulina monomérica.Valores esperadosO intervalo de referência foi determinado, utilizando soros de 200 dadores adultos saudáveis. O limite superiordeste intervalo é expresso em μg equivalente por mL (μg Eq/mL).O intervalo descrito em baixo serve apenas de referência. Os testes de ELISA são muito sensíveis e capazes dedetectar pequenas diferenças nas amostras. Recomenda-se que cada laboratório determine os seus intervalos dereferência, baseando-se em técnicas e equipamento utilizado.Valores esperados< 4,4μg Eq/mL Resultado negativo4,4 -