Tillverkning av DNA-konstrukt med hjälp av enzymatiska metoder

L Titrering av DNA-handtag med polystyrenkulor
Titrering av DNA-handtag skapade med RE-metoden
I Tabell L-1 visas innehåll i de olika brunnarna på den 1 % agarosgelen.
Tabell L-1: Prover som laddades på 1 % agaros.
Provnummer Innehåll
1 5 µl O’RangeRuler 500 bp DNA Ladder (0, 5 µg/µl)
1 µl Sybrgold (2x)
12 µl 15 % ficollösning
2 1 µl RE1 (539 pmol DNA-bas)
1 µl Sybrgold (2x)
16 µl 15 % ficollösning
2 µl 6X Orange DNA Loading Dye
3 1 µl RE1-handtag (539 pmol DNA-bas)
0,5 µl streptavidininmärkta polystyrenkulor (2,1 µm 0,5% w/v)
1 µl Sybrgold (2x)
15,5 µl 15 % ficollösning
2 µl 6X Orange DNA Loading Dye
4 1 µl RE1-handtag (539 pmol DNA-bas)
1 µl streptavidininmärkta polystyrenkulor(2,1 µm 0,5% w/v)
1 µl Sybrgold (2x)
15 µl 15 % ficollösning
2 µl 6X Orange DNA Loading Dye
5 1 µl RE1-handtag (539 pmol DNA-bas)
1,5 µl streptavidininmärkta polystyrenkulor (2,1 µm 0,5% w/v)
1 µl Sybrgold (2x)
14,5 µl 15 % ficollösning
2 µl 6X Orange DNA Loading Dye
6 1 µl RE1-handtag (539 pmol DNA-bas)
2 µl streptavidininmärkta polystyrenkulor (2,1 µm 0,5% w/v)v 1 µl Sybrgold
(2x)
14 µl 15 % ficollösning
2 µl 6X Orange DNA Loading Dye
7 1 µl RE1-handtag (539 pmol DNA-bas)
3 µl streptavidininmärkta polystyrenkulor (2,1 µm 0,5% w/v)
1 µl Sybrgold (2x)
13 µl 15 % ficollösning
2 µl 6X Orange DNA Loading Dye
8 1 µl RE2 (539 pmol DNA-bas)
1 µl Sybrgold (2x)
16 µl 15 % ficoll-lösning
2 µl 6X Orange DNA Loading Dye
9 1 µl RE2-handtag (539 pmol DNA-bas)
2,5 µl Anti-DIG inmärkta polystyrenkulor (2,17 µm 0,1% w/v)
1 µl Sybrgold (2x)
13,5 µl 15 % ficoll-lösning
2 µl 6X Orange DNA Loading Dye
10 1 µl RE2-handtag (539 pmol DNA-bas)
5 µl Anti-DIG inmärkta polystyrenkulor (2,17 µm 0,1% w/v)
1 µl Sybrgold (2x)
11 µl 15 % ficoll-lösning
2 µl 6X Orange DNA Loading Dye
42