Instruktion för tagning, hantering och tolkning av BVD ... - Svensk Mjölk
Instruktion för tagning, hantering och tolkning av BVD ... - Svensk Mjölk
Instruktion för tagning, hantering och tolkning av BVD ... - Svensk Mjölk
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
ATT TÄNKA PÅ NÄR DU<br />
TAR, HANTERAR OCH TOLKAR<br />
<strong>BVD</strong>-PROVER<br />
FoU/Ann Lindberg 2003-04-07<br />
5 - 1
INNEHÅLL<br />
UTTAGNING OCH HANTERING AV BLODPROV ....................................................................... 3<br />
Svansprov<strong>tagning</strong>............................................................................................................... 3<br />
Hantering <strong>av</strong> blodprover.................................................................................................... 3<br />
UTTAGNING OCH HANTERING AV MJÖLKPROV..................................................................... 3<br />
Prov<strong>tagning</strong>........................................................................................................................ 3<br />
Hantering <strong>av</strong> mjölkprover .................................................................................................. 4<br />
TOLKNING AV PROVSVAR ...................................................................................................... 5<br />
Positivt/negativt <strong>och</strong> betydelsen <strong>av</strong> absorbansvärdet ........................................................ 5<br />
Blodprov............................................................................................................................. 5<br />
<strong>Mjölk</strong>prov ........................................................................................................................... 7<br />
ATT TÄNKA PÅ….................................................................................................................... 8<br />
Prov<strong>tagning</strong> <strong>av</strong> kalvar <strong>för</strong>e råmjölk ................................................................................... 8<br />
Jäm<strong>för</strong>elser <strong>av</strong> resultat från serologiska analyser på mjölk <strong>och</strong> blod från samma djur<br />
eller grupp <strong>av</strong> djur.............................................................................................................. 8<br />
Hur länge varar immuniteten?........................................................................................... 9<br />
Hur ska gamla antikroppspositiva prover bedömas? ........................................................ 9<br />
ANALYSVÄRDESNYCKEL................................................................................................ 10<br />
FoU/Ann Lindberg 2003-04-07<br />
5 - 2
Ut<strong>tagning</strong> <strong>och</strong> <strong>hantering</strong> <strong>av</strong> blodprov<br />
Använd alltid 5 ml serumrör vid blodprov<strong>tagning</strong>, eftersom 10 ml rör inte kan hanteras i<br />
laboratoriets robotsystem.<br />
Svansprov<strong>tagning</strong><br />
Svansprov<strong>tagning</strong> är att rekommendera fram<strong>för</strong> halsprov<strong>tagning</strong> då detta med<strong>för</strong> mindre<br />
stress <strong>för</strong> djuren <strong>och</strong> minskar risken <strong>för</strong> arbetsskador.<br />
Hantering <strong>av</strong> blodprover<br />
Sträva alltid efter ta/skicka proverna så att de finns på laboratoriet dagen därpå. Om du<br />
är tveksam huruvida provet kommer att nå laboratoriet <strong>för</strong>e helgen är det bättre att placera<br />
provet i kyl <strong>och</strong> sända det måndagen efter.<br />
Hemolys kan påverka virusisoleringen genom att celltillväxten (<strong>och</strong> därigenom cellmorfologin)<br />
störs. Risken <strong>för</strong> hemolys ökar t.ex. då man har gjort upprepade ”stick” genom gummikorken,<br />
t.ex. <strong>för</strong> att djuret <strong>av</strong> någon anledning har varit svårt att provta. I sådana situationer<br />
kan det vara bättre att ta ett nytt provrör. Om provet är så hemolyserat att det inte kan användas<br />
<strong>för</strong> analys begär laboratoriet in ett nytt prov.<br />
Undvik all form <strong>av</strong> kontaminering <strong>av</strong> blodet. Bakterietillväxt kan med<strong>för</strong>a att celltoxiska<br />
substanser bildas <strong>och</strong>/eller att pH <strong>för</strong>ändras. Båda dessa faktorer påverkar analyssäkerheten<br />
negativt.<br />
Ut<strong>tagning</strong> <strong>och</strong> <strong>hantering</strong> <strong>av</strong> mjölkprov<br />
Prov<strong>tagning</strong><br />
Undvik all form <strong>av</strong> kontaminering <strong>av</strong> mjölken. Organiska <strong>för</strong>oreningar (dynga, foderrester,<br />
hår) kan störa analysen. Tag där<strong>för</strong> mjölkprovet på ungefär samma sätt som du skulle ta ett<br />
mjölkprov <strong>för</strong> bakteriologisk odling.<br />
Undvik att ta mjölk som är <strong>för</strong>ändrad på något sätt. Med detta <strong>av</strong>ses såväl mastitmjölk,<br />
som mjölk från nykalvade kor (råmjölk) <strong>och</strong> sinmjölk.<br />
Vid samlingsprov<strong>tagning</strong> på mjölk: Se till att det kärl som används är väl rengjort! Sträva<br />
efter att ta lika mycket mjölk från varje ko <strong>och</strong> <strong>för</strong> sedan över en mindre volym till ett 5 ml<br />
mjölkrör med bronopol.<br />
FoU/Ann Lindberg 2003-04-07<br />
5 - 3
Hantering <strong>av</strong> mjölkprover<br />
<strong>Mjölk</strong> som provmaterial är känsligare än blod. Den <strong>för</strong>ändras (surnar) relativt snabbt om den<br />
inte hanteras på rätt sätt. <strong>Mjölk</strong>rör (5 ml) med tillsats <strong>av</strong> bronopol (ett konserveringsmedel,<br />
blåfärgat) bör användas <strong>för</strong> att minska denna risk. Härsken mjölk har ett lägre pH än färsk<br />
mjölk. Detta kan påverka antikroppsbestämningen så att falskt negativa resultat erhålls.<br />
Samma råd som <strong>för</strong> blod gäller där<strong>för</strong>, d.v.s. sträva efter att tagna prover skall vara på<br />
laboratoriet dagen efter. Om du är tveksam huruvida provet kommer att nå laboratoriet <strong>för</strong>e<br />
helgen är det bättre att placera provet i kyl <strong>och</strong> sända det på måndagen efter.<br />
FoU/Ann Lindberg 2003-04-07<br />
5 - 4
Tolkning <strong>av</strong> provsvar<br />
Positivt/negativt <strong>och</strong> betydelsen <strong>av</strong> absorbansvärdet<br />
De gränsvärden som idag används <strong>för</strong> att klassificera prover som antikroppspositiva resp. antikroppsnegativa<br />
återfinns i Analysvärdesnyckeln längst bak i detta dokument. Kategoriseringen<br />
i ”+” resp. ”-” är en <strong>för</strong>enkling som krävs <strong>av</strong> praktiska skäl. Mer information kan utläsas ur<br />
absorbansvärdet. Absorbansvärdet bör principiellt tolkas enligt följande;<br />
• En absorbans över gränsvärdet innebär att antikroppar påvisats i den mängd att det är <strong>av</strong><br />
betydelse ur diagnostisk synpunkt.<br />
• En uppmätt absorbans under gränsvärdet innebär att antikroppar har påvisats. Det går<br />
emellertid inte att uttala sig om dessa är tillräckliga <strong>för</strong> att neutralisera virus vid en infektion.<br />
Det ska istället tjäna som ett observandum t.ex. vid <strong>tolkning</strong> <strong>av</strong> resultat från besättningsprov<strong>tagning</strong>ar,<br />
jäm<strong>för</strong>else mjölk-/blodprov <strong>och</strong> dylikt (se <strong>av</strong>snitt under ”Att tänka<br />
på…”), än ett diagnostiskt fynd.<br />
• Om ingen absorbans kan uppmätas i serum eller mjölk är djuret strikt antikroppsnegativt<br />
<strong>av</strong>seende <strong>BVD</strong>V.<br />
Blodprov<br />
I det följande tillämpas den enkla kategoriseringen (+/-) <strong>för</strong> att visa på olika <strong>tolkning</strong>smöjligheter<br />
<strong>av</strong> analyssvar. Under det här <strong>av</strong>snittet listas <strong>tolkning</strong>ar som är tänkbara vid respektive<br />
utfall <strong>av</strong> blodprovsanalys.<br />
AK + (VI -, virusisolering ev. ej ut<strong>för</strong>d)<br />
1. Djuret har maternala antikroppar. Tumregel: Om djuret är yngre än 6 månader bör man<br />
överväga detta såvida inte modern är konstaterat antikroppsnegativ efter kalvens födelse.<br />
Hur länge råmjölksantikroppar kvarstår beror bl.a. på koncentrationen <strong>av</strong> dessa i råmjölkens,<br />
<strong>av</strong> kalven konsumerad mängd <strong>och</strong> kalvens upp<strong>tagning</strong>s<strong>för</strong>måga.<br />
Som regel brukar de maternala antikropparna kvarstå längre hos kalvar som gått med modern<br />
(ex köttdjur). I normalfallet är dock även denna kategori kalvar antikroppsnegativa vid 6<br />
månaders ålder.<br />
2. Djuret har träffat på <strong>BVD</strong>-virus, <strong>och</strong> antikropparna är ett tecken på aktiv immunitet.<br />
Höga absorbansvärden kan bero på att;<br />
• djuret är <strong>för</strong>hållandevis nyinfekterat <strong>och</strong> du har tagit provet just när antikroppnivån är på<br />
topp,<br />
FoU/Ann Lindberg 2003-04-07<br />
5 - 5
• djuret är dräktigt <strong>och</strong> bär på en persistent infekterad kalv,<br />
• djuret har träffat på <strong>BVD</strong>-infektion tidigare i livet men har boostrats vid ett eller flera<br />
tillfällen, eller<br />
• djuret smittades som foster under sen dräktighet. Detta tenderar att ge höga kvarstående<br />
titrar.<br />
3. Djuret är vaccinerat mot <strong>BVD</strong>V. Detta kan vara aktuellt <strong>för</strong> importerade djur. Den praktiska<br />
betydelsen kan vara att den immunitet som påvisats inte säkert är fosterskyddande vid<br />
<strong>för</strong>nyad infektion.<br />
AK - / VI -<br />
1. Djuret har aldrig varit i kontakt med <strong>BVD</strong>-virus, <strong>och</strong> saknar där<strong>för</strong> immunitet.<br />
2. Djuret är nyinfekterat <strong>och</strong> har ännu inte hunnit bilda antikroppar.<br />
3. Djuret är en kroniker men har missats i virusisoleringen. Detta händer i sällsynta fall,<br />
fram<strong>för</strong> allt med kroniker som klarat sig till vuxen ålder. Det är möjligt att påvisa sådana<br />
djur genom att använda alternativa konfirmerande tester - kontakta Virologiska laboratoriet<br />
på SVA i sådana fall.<br />
OBS! Falskt negativa djur <strong>av</strong>slöjar sig alltid <strong>för</strong>r eller senare i en systematiskt genom<strong>för</strong>d<br />
sanering, eftersom man kommer att finna kalvar som serokonverterat <strong>och</strong> som är födda efter<br />
den tidpunkt då man ansett att smittan upphört i besättningen (”sista kronikern slaktats”).<br />
Om det är ett hondjur kan misstanke lätt <strong>av</strong>färdas/bekräftas genom att kontrollera ev.<br />
<strong>av</strong>kommas status. Om ett seronegativt <strong>och</strong> virusnegativt djur fött en normal kalv, så är<br />
även hon normal. Om ett seronegativt <strong>och</strong> virusnegativt djur fött en kroniker är det troligt<br />
att virusisoleringen är falskt negativ, <strong>och</strong> att hon själv är persistent infekterad.<br />
AK - / VI +<br />
1. Djuret är persistent infekterat med <strong>BVD</strong>-virus.<br />
2. Djuret är primärinfekterat, <strong>och</strong> provet togs under viremifasen. Vid omprov har ett sådant<br />
djur serokonverterat <strong>och</strong> kommer då att vara AK+, VI-. För att undvika att primärinfekterade<br />
djur slaktas i onödan skall persistent infektion alltid konfirmeras om misstanke<br />
finns att den viruspositiva kalven inte är kroniker.<br />
OBS! Den prov<strong>tagning</strong>sstrategi som tillämpas allmänt (prov<strong>tagning</strong> <strong>av</strong> kalvar tidigast vid<br />
ca 12 v.) sammanfaller med den tidpunkt då de maternala antikropparna <strong>av</strong>tagit så pass att<br />
kalvarna kan infekteras om det finns en kroniker närvarande. Detta ökar ”risken” att fånga<br />
en primärinfekterad kalv i viremifas.<br />
FoU/Ann Lindberg 2003-04-07<br />
5 - 6
<strong>Mjölk</strong>prov<br />
Under det här <strong>av</strong>snittet listas <strong>tolkning</strong>ar som är tänkbara vid respektive utfall <strong>av</strong> mjölkprovsanalys.<br />
OBS! För virusisolering krävs serum. På mjölk görs endast antikroppsbestämning.<br />
AK +<br />
Tolkningen är i princip densamma som <strong>för</strong> blodprover, med undantag <strong>för</strong> att det inte kan röra<br />
sig om maternala antikroppar.<br />
OBS! Koncentrationen <strong>av</strong> antikroppar i mjölk är omvänt proportionell mot <strong>av</strong>kastningsnivån,<br />
d.v.s. ju mer kon mjölkar, desto mer späds antikropparna ut. För ett djur med en<br />
signifikant antikroppsnivå spelar detta mindre roll - detta djur kommer att vara antikroppspositivt<br />
o<strong>av</strong>sett laktationsstadium. Däremot kan detta vara en källa till att djur med spår <strong>av</strong> antikroppar<br />
faller ut som positiva om de provtas i nära anslutning till kalvning eller sin. En sådan<br />
ko faller ut som negativ om hon provtas då mjölkproduktionen är på en högre nivå.<br />
AK -<br />
Tolkningen är densamma som <strong>för</strong> blodprover, d.v.s. djuret kan vara osmittat, nysmittat eller<br />
persistent infekterat. Eftersom virusisolering inte kan ut<strong>för</strong>as på mjölk måste <strong>för</strong>nyad prov<strong>tagning</strong><br />
göras ifall persistent infektion skall kunna uteslutas.<br />
FoU/Ann Lindberg 2003-04-07<br />
5 - 7
Att tänka på….<br />
Prov<strong>tagning</strong> <strong>av</strong> kalvar <strong>för</strong>e råmjölk<br />
Ibland tillämpas prov<strong>tagning</strong> <strong>av</strong> kalvar <strong>för</strong>e råmjölk, <strong>för</strong> att snabbt fånga upp kalvar som är<br />
”kroniker”. Det man bör veta innan man börjar tillämpa detta är att dessa prover i högre grad<br />
än andra prover innehåller celltoxiska substanser som <strong>för</strong>svårar eller omöjliggör en pålitlig<br />
virusisolering. En möjlig orsak är en ”normal” neonatal bakteriemi orsakad <strong>av</strong> bakterier som<br />
kommit in i blodbanorna via n<strong>av</strong>elsträngen. Fenomenet är dokumenterat bl.a. på griskultingar.<br />
Resultatet blir att laboratoriet måste begära in ett nytt prov, <strong>och</strong> att syftet med den tidiga<br />
prov<strong>tagning</strong>en inte uppnås.<br />
Viruset självt kan också kan påverkas negativt, så att virusisoleringen misslyckas. Där<strong>för</strong> är en<br />
negativ virusisolering från en nyfödd kalv mindre till<strong>för</strong>litlig än om kalven uppnått 10-12<br />
veckors ålder. En positiv virusisolering på en nyfödd kalv är dock ett till<strong>för</strong>litligt resultat.<br />
OBS! Laboratoriet begär alltid in ett nytt prov om man kunnat bedöma att det finns en toxisk<br />
påverkan på cellerna i den grad att analysen inte är kunnat ut<strong>för</strong>as på ett bra sätt.<br />
Jäm<strong>för</strong>elser <strong>av</strong> resultat från serologiska analyser på mjölk <strong>och</strong> blod från samma djur<br />
eller grupp <strong>av</strong> djur.<br />
Serum analyseras i en spädning på 1:100, med ett gränsvärde på 0,20. <strong>Mjölk</strong> analyseras ospätt<br />
med ett gränsvärde på 0,05 <strong>för</strong> individmjölk <strong>och</strong> 0,10 <strong>för</strong> samlingsprov. För övrigt är det<br />
samma test. Mängden antikroppar i mjölk är mindre än i serum, men hur mycket mindre kan<br />
variera något mellan individer <strong>och</strong> laktationsstadium. I serum är nivån <strong>för</strong>hållandevis stabil<br />
(bortsett från det normala faktum att den <strong>av</strong>tar med tiden om djuret inte träffar på infektionen<br />
igen) .<br />
Om man tar ett mjölkprov <strong>och</strong> ett serumprov samtidigt kan det hända att absorbansvärdet <strong>för</strong><br />
mjölkprovet är t.ex. 0,15 (”svagt positivt”), men att serumprovets värde är så lågt som 0,03<br />
(negativt). Detta är inte särskilt märkvärdigt med tanke på att;<br />
1. serumprovet är mer spätt,<br />
2. gränsen <strong>för</strong> att klassificera mjölk som positiv är lägre, <strong>och</strong><br />
3. det finns individuella variationer över laktationer i hur mycket <strong>av</strong> antikropparna som går<br />
över till mjölk.<br />
Detta är som regel orsaken till ”o<strong>för</strong>klarligt” positiva samlingsprover, där man vid individuella<br />
omprover på blod finner att alla provade djur är serologiskt negativa. Tolkningen blir då<br />
att något eller några <strong>av</strong> djuren har spår <strong>av</strong> <strong>BVD</strong>V-antikroppar, men att de på inget sätt kan<br />
vara <strong>för</strong>knippade med en färsk infektion eftersom omproven på serum var negativa.<br />
FoU/Ann Lindberg 2003-04-07<br />
5 - 8
Hur länge varar immuniteten?<br />
Genomgången infektion ger kvarstående antikroppstitrar under en lång tid. För många kor kan<br />
det i praktiken vara detsamma som hela livet. Det ska dock påpekas att man i studier <strong>av</strong> durationen<br />
<strong>av</strong> antikroppstitrar <strong>och</strong> fosterskyddande effekt efter naturlig infektion inte skilt på djur<br />
som endast träffat på infektionen en gång <strong>och</strong> djur som under en längre tid befunnit sig i en<br />
infekterad besättning. De sistnämnda har sannolikt där<strong>för</strong> boostrats en eller fler gånger vilket<br />
skulle ge en bättre fosterskyddande effekt. Där<strong>för</strong> är det ännu osäkert ifall den fosterskyddande<br />
effekten även gäller kor med låga antikroppsnivåerna (strax över/under gränsvärdet). Vissa<br />
anser att den ”immunologiska beredskap” som dessa djur har är tillräcklig <strong>för</strong> att skydda fostret<br />
om kon återinfekteras, andra är mer tveksamma.<br />
Trots detta - i praktiska situationer brukar man säga att genomgången infektion ger fosterskyddande<br />
immunitet. OBS! Ett djur med normal immunitet som fött en persistent infekterad<br />
kalv föder aldrig en PI kalv igen, d.v.s. hon är definitivt skyddad <strong>för</strong> resten <strong>av</strong> livet!<br />
Antikroppsnivån på djur som aldrig boostrats (d.v.s. där infektionen upphört i besättningen innan<br />
detta hunnit ske) kan med tiden sjunka till värden strax över eller t.o.m. under gränsen <strong>för</strong> vad<br />
vi klassar som positivt. Sådana djur kommer dock alltid att ha mätbara, om än låga absorbansvärden.<br />
Med andra ord, ett djur som genomgått infektionen bli aldrig strikt serologiskt<br />
negativ.<br />
Hur ska gamla antikroppspositiva prover bedömas?<br />
I vissa lägen vill man uttala sig om ett djurs immunitet mot <strong>BVD</strong>-infektion på basis <strong>av</strong> gamla<br />
resultat. Det kan t.ex. gälla en <strong>för</strong>säljningssituation. Det kan också vara aktuellt om besättningen<br />
återinfekterats <strong>och</strong> man vill ”sortera bort” tidigare antikroppspositiva djur från de som<br />
skall provtagas vid den <strong>för</strong>sta saneringsprov<strong>tagning</strong>en (”screeningen”).<br />
Det man bör överväga när man ska bedöma om det är sannolikt att ett djur fortfarande har<br />
skydd är;<br />
• Var djuret yngre än 6 månader vid <strong>för</strong>ra prov<strong>tagning</strong>en? Om svaret är ja bör djuret provas<br />
om.<br />
• Låg absorbansvärdet strax över gränsvärdet? Om svaret är ja kan djuret med <strong>för</strong>del omprovas.<br />
Problemet är i viss mån filosofiskt, då man inte kan veta om titern var på uppåtgående<br />
eller nedåtgående vid det <strong>för</strong>ra provet. Man vet alltså inte om det rörde sig om ”färska” eller<br />
”gamla” antikroppar.<br />
FoU/Ann Lindberg 2003-04-07<br />
5 - 9
ANALYSVÄRDESNYCKEL<br />
Brytgränser <strong>för</strong> klassificering <strong>av</strong> prov som negativt/positivt vid resp. provmetod:<br />
Tankmjölk:<br />
Samlingsprov:<br />
Individprov -serum:<br />
Individprov -mjölk:<br />
Klass 0: abs. < 0,05<br />
Klass 1: abs. ≥ 0,05 <strong>och</strong> < 0,25<br />
Klass 2: abs. ≥ 0,25 <strong>och</strong> < 0,55<br />
Klass 3: abs. ≥ 0,55<br />
Negativt *) : abs. ≤ 0,10<br />
Positivt: abs. > 0,10<br />
Negativt ♣) : abs. ≤ 0,20<br />
Positivt: abs. > 0,20<br />
Negativt: abs. < 0,05<br />
Positivt: abs. ≥ 0,05<br />
*) Ett absorbansvärde i samlingsprov på 0,05 - 0,10 visar på spår <strong>av</strong> antikroppar.<br />
♣ ) Ett absorbansvärde i serum på 0,01 - 0,19 visar på spår <strong>av</strong> antikroppar.<br />
FoU/Ann Lindberg 2003-04-07<br />
5 - 10