Подсекция «Антропология

высаживания являются оптимальными для получения пролонгированной формы альфаинтерферона
и, вероятнее всего, для многих других белковых препаратов.
Исследование клеток нейронов в культуре при патологии и в норме
методами биофизики и нанобиотехнологии
Дзюбенко Егор Вячеславович (Москва, ejeek@yandex.ru)
На основные свойства нервной клетки – возбудимость и проведение нервного импульса
сильно влияет морфологическое и энергетическое состояние клетки (Klapstein et al., 2001;
Costa et al., 2008). Цитоскелет отростков нервных клеток – сложный комплекс
нейрофиламентов, микротрубочек, актиновых филаментов и ассоциированных с ними
белков, играющий важнейшую роль в процессах направленного роста, стабилизации и
регуляции нейритов (Dent, Gertler, 2003). Таким образом, цитоскелет нейритов является
мишенью исследования нейродегенерации в целом и аксональной дегенерации в норме и
при патологии.
Изменение мембранного потенциала митохондрий, их распределение и форма, отражает
физиологическое состояние клетки (Sureda et al., 1997). Метод атомной силовой
микроскопии высокоэффективен при исследовании тонкой морфологии нативной нервной
клетки в среде роста, при измерении упругих свойств мембраны и в целях нанохирургии
(Xiong et al., 2009; McNally, Ben Borgens, 2004).
В ходе данной работы были получены первичные культуры клеток нейронов эмбрионов
курицы Е8–Е13, диссоциированные и органотипичные. С точки зрения морфологии
проведено исследование цитоскелета нервных отростков методом конфокальной лазерной
сканирующей микроскопии при использовании цитохимических и иммуноцитохимических
подходов. Рассмотрена общая морфология клеток, их отростков и конусов роста с помощью
атомной силовой микроскопии и сделана попытка измерения упругих свойств мембраны
различных областей клетки. Применен потенциал-чувствительный флуорофор родамин 123
для исследования мембранного потенциала митохондрий. Кроме того, применена модель
глутаматной цитотоксичности при изучении дегенеративных процессов в нервной клетке.
Влияние дитиотреитола на Н + -транспортирующие системы плазмалеммы
клеток Chara: связь с нефотохимическим тушением флуоресценции
Додонова С.О., Крупенина Н.А. (Москва, dodonova.sveta@gmail.com)
В освещенных клетках водоросли Chara corallina величина нефотохимического тушения
флуоресценции (NPQ), связанная с градиентом рН на тилакоидной мембране (ТМ), четко
скоординирована с профилем рН в апопласте (рНo). Неоднородный профиль рН у
поверхности клетки обусловлен чередующимися доменами плазмалеммы с активным
выведением Н + и с ΔμН-зависимым электрогенным поступлением Н + в клетку по протонным
каналам в щелочных зонах. В участках клетки с рНo~10 уровень NPQ повышен в связи с
закислением люмена и высоким градиентом pH на ТМ. Известно, что NPQ ослабляется при
действии дитиотреитола (ДТТ – агент, препятствующий образованию S-S связей в белках,
известный как ингибитор виолаксантин-деэпоксидазы). В работе прослежено влияние ДТТ
на NPQ в хлоропластах и встречно направленные трансмембранные потоки Н + в щелочных и
кислых зонах клеток Chara. Об активности Н + помпы и Н + каналов судили по сдвигам рНo
в соответствующих примембранных областях после остановки входящего и выходящего
потоков Н + , вызванной генерацией потенциала действия (ПД). Значения коэффициента NPQ
получены с использованием метода насыщающих световых импульсов на базе
микрофлуорометра Microscopy PAM (Walz); рН у поверхности клетки измеряли с помощью
сурьмяного рН-микроэлектрода. Инкубация клеток Chara в среде с 2мМ ДТТ приводила к
сдвигу S-образных световых кривых NPQ в область высоких интенсивностей света как в
кислой, так и в щелочной зонах. Такое снижение уровня NPQ можно объяснить
уменьшением количества зеаксантина в антенне фотосистемы 2. В контрольных опытах
амплитуда ПД-индуцированных изменений pH в щелочных участках была в несколько раз
больше, чем в кислых. При обработке клеток ДТТ амплитуда изменений pH в щелочных
зонах заметно уменьшалась, а в кислых, наоборот, увеличивалась. Вероятно, это связано
20