Подсекция «Антропология

характеристики аскомицета Neurospora crassa, выбранного в качестве наиболее изученной
модели.
3(R)-Гидрокси-(5Z,8Z,11Z,14Z)-эйкозатетраеновая кислота была наработана в
препаративных количествах с использованием ацетиленовой стратегии синтеза, ключевым
моментом которой является реакция кросс-сочетания терминальных ацетиленовых
фрагментов и синтонов пропаргильного типа. Были проведены исследования индикативных
характеристик стресса у грибов под воздействием разных концентраций 3-НЕТЕ: изменение
содержания карбонильных групп в белках мицелия гриба и концентрации каротиноидов при
световом инкубировании. Применяемые биохимические методики позволяют рассчитать
количественные характеристики на основе спектрофотометрических данных. Было показано,
что микромолярные концентрации 3-НЕТЕ влияют на содержание каротиноидов у N. crassa
дозозависимым образом, оптимальной для выработки каротиноидов оказались концентрации
5-10 мкМ. Было определено повышение содержания карбонильных групп в белках под
влиянием 3-HETE в микромолярных концентрациях (1-5 мкМ), что указывает на развитие
оксидативного стресса у грибов.
Исследование мицелия гриба на разных стадиях роста при помощи микроскопа позволило
установить, что добавление 3-НЕТЕ в питательную среду снижает скорость роста гиф,
усиливая при этом их агрегацию, а также ингибирует спорообразование N. сrassa.
Особую благодарность выражаю к.х.н. с.н.с. Грозе Н.В. (МИТХТ им. М.В.Ломоносова) и
д.б.н. проф. Белозерской Т.А. (Институт биохимии им. А.Н.Баха) за помощь в проведении
исследований и интерпретации результатов.
NADH: убихинон оксидоредуктаза (комплекс I) из митохондрий мозга
Калашников Денис Сергеевич (Москва, denis.kalashnikov@gmail.com)
Комплекс I, или митохондриальная протон-транслоцирующая NADH:убихинон
оксидоредуктаза (ЕС 1.6.99.3) наиболее сложно устроенный компонент дыхательной цепи.
Каталитические свойства и механизмы регуляции фермента полно изучены с
использованием препаратов полученных из сердца млекопитающих или на примере
прокариотических гомологов фермента, NDH-1. Неясен вопрос о различиях в
каталитических свойствах и возможная специфика регуляции комплекса I из различных
тканей в норме и патологии. Мы впервые получили препарат сопряженных
субмитохондриальных частиц из митохондрий мозга свиньи (М-СМЧ). М-СМЧ
катализируют NADH-оксидазную (0,8 мкмоль/мин на мг белка) и NADH:Q 1-редуктазную
реакции (0,6 мкмоль/мин на мг белка) чувствительные к ротенону (30 ºC и рН 8,0). Величина
дыхательного контроля сопряженных с помощью олигомицина М-СМЧ при окислении
NADH составляет 5 в присутствии БСА (2 мг/мл в пробе) и 6-7 в присутствии подобранной
концентрации poly-Lys, но в отсутствие БСА. Дыхательный контроль ~3, когда субстратом
дыхания является сукцинат. Содержание комплекса I в препарате (0,06 нмоль/мг) оценили с
помощью титрования NADH-оксидазной активности М-СМЧ с помощью пиерицидина,
ротенона и NADH-OH, специфического ингибитора, прочно связывающегося с активным
центром фермента. Содержание цит. a в полученном препарате составляет 0,17-0,19
нмоль/мг белка (для расчетов использовали миллимолярный коэффициент экстинкции ΔА605-
630 равный 24/cm). По стимуляции каналообразущим антибиотиком аламетицином NADHоксидазной
активности в присутствии разобщителя оценивали содержание правильно
ориентированных (inside-out) М-СМЧ, составляющее ~70%. Мы обнаружили, что
пальмитиновая кислота в присутствии Ca 2+ приводит к необратимому ингибированию
NADH:Q1-редуктазной активности М-СМЧ при щелочных значениях рН. Ингибирование
развивается во времени и приводит к выходу части субъединиц комплекса I в супернатант,
на что указывает обнаруженная нами в супернатанте NADH:гексааминорутений-редуктазная
активность. С помощью электрофореза по методу Лэммли в супернатанте обнаруживается
полоса с кажущейся молекулярной массой порядка 56 кДа. Это указывает на то, что под
действием пальмитиновой кислоты происходит солюбилизация FP-фрагмента комплекса I,
Ca 2+ способствует этому. Эффект специфичен для пальмитиновой кислоты, по сравнению с
другими длинноцепочечными жирными кислотами, не связан с действием пальмитиновой
52