Подсекция «Антропология

структуры цитохрома c, направленное на повышение упорядоченности ADD-cайта,
осуществляли при помощи АНИС-метода. Проанализирован ряд аминокислотных
последовательностей в сайтах с различной плотностью ЭЛИС негомологичных белков и
протеома E.coli. Определена частота встречаемости каждой аминокислоты в ЭЛИС разного
ранга и выявлены наиболее вероятные аминокислоты, способствующие конструированию
ADD+ сайта. Таким образом, обозначены основные направления по включению тех или
иных аминокислот в сайт 73-88 а.о. с целью увеличения структурированности этого района.
В данный момент проводится анализ информационных структур цитохрома c
с предложенными аминокислотными заменами. Результаты исследования АНИС-методом
необходимы для определения конкретных мутаций в гене цитохрома c дикого типа.
Получение потенциал-зависимого калиевого канала Heag2
для исследования методом электронной микроскопии
Пищальникова Анастасия Владимировна (Москва, bionastya@gmail.com)
Потенциал зависимые калиевые каналы, играют ключевую роль в фунционировании
возбудимых клеток. Эти каналы также важны в качестве мишени для лекарственных агентов
при различных заболеваниях и наследственных расстройствах. Для определения
потенциальных сайтов связывания лигандов важно знание структуры канала. Для канала
heag2, в настоящее время не известна ни его полная структура, и нет никаких прямых
структурных данных о строении и расположении его цитоплазматических доменов, которые
играют важную роль в функционировании канала.
В данной работе канал heag2 был экспрессирован в эукариотической клеточной линии
Vero, выделен и очищен на аффинной колонке с пришитыми к ней поликлональными
антителами к 1D4-последовательности, расположенной на С-конце канала. Высокий уровень
трансфекции был получен при использовании коммерческого трансфекционного агента
Metafecten TM PRO (Biontex). Успешность экспрессии и очистки канала была подтверждена
методом белкового электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) и вестерн-блотом.
То, что экспрессированные каналы heag2 имеют правильную структуру было
подтверждено с помощью флуоресцентно-меченного аджитоксина AgTx2. Данный токсин
обратимо связывается с поровой частью канала, расположенного в мембране клетки.
Связывание происходит только с теми молекулами калиевых потенциал-зависимых каналов,
которые образуют правильный гомотетрамер. Окраска происходит только с внешней
стороны клеток и только тех каналов, которые находятся в клеточной мембране. Таким
образом данный метод позволил подтвердить успешность трансфекции каналов и
правильность их структуры непосредственно на живой клеточной культуре.
Было получено достаточное количество белка канала heag2 для исследования его
структуры методом электронной микроскопии с негативным окрашиванием. В результате
исследования были получены электронные микрофотографии с отчетливым изображением
отдельных молекул канала.
В дальнейшем, посредством обработки полученных двумерных изображений канала
heag2, предполагается получить трехмерную структуру данного канала, а также определить
локализацию цитоплазматичекого домена PAS. Для этого планируется получить структуру
мутантного канала heag2ΔPAS, у которого отсутствует цитоплазматический домен PAS, и
сравнить её со структурой полноразмерного канала для определения локализации домена
PAS. Полученные структурные данные могут способствовать лучшему понимания
механизмов функционирования калиевых потенциал-зависимых каналов.
Молекулярное моделирование структуры серотонинового 5-HT3 рецептора
Попинако Анна Владимировна (Москва, popinako@rambler.ru)
С модификациями в субъединицах серотонинового 5-HT3 рецептора связаны некоторые
болезни, в частности: мигрень, неврологические заболевания шизофрения, депрессия,
зависимость. Проведенные исследования помогут выяснить причины и механизмы развития
болезней и найти путь их лечения в будущем.
34