Подсекция «Антропология

разобщитель трансмембранного протонного градиента; валиномицин – разобщитель
электрического градиента; этилмалеимид – ингибитор перехода мембран из состояния 1 в
состояние 2; дитиотреитол- ингибитор ксантофиллового цикла. ИКФ возбуждались светом
интенсивностью 3000 μE m -2 s -1 в течение 5 минут у зелёной водоросли Chlamydomonas
reinhardtii и диатомовой Thalassiosira weissflogii с использованием флуорометра Handy Pea.
Кроме того проводили измерения кинетик замедленной флуоресценции с использованием
фосфороскопа, созданного на кафедре биофизики МГУ.
По результатам работы были определенны механизмы, которые обуславливают развитие
тех или иных фаз нефотохимического тушения флуоресценции на кинетиках индукции
флуоресценции у Chlamydomonas reinhardtii и Thalassiosira weissflogii.
Исследование участия фосфатидилинозитол 3-киназы, протеинкиназы В/Akt
и киназы гликогенсинтазы-3beta в реакции нейронов и глиальных клеток рака
на фотодинамическое воздействие
Командиров М. А., Князева Е.А. (Ростов-на-Дону, mkomandirov@yandex.ru)
Фотодинамическое (ФД) воздействие, применяющееся для лечения рака, основано на
развитии окислительного стресса в окрашенных клетках при освещении и в итоге
некротической или апоптозной смерти. Эти процессы контролируются внутриклеточной
сигнальной системой. Важную роль в выживаемости клеток может играть сигнальный путь с
участием фосфатидилинозитол 3-киназы, протеинкиназы В/Akt и киназы гликогенсинтазы-
3beta (PI3K/Akt/GSK-3beta). Для изучения его участия в ФД повреждении нейронов и
окружающих глиальных клеток (ГК) в изолированном рецепторе растяжения рака
использовались LY294002 (10 мкМ) и вортманнин (120 нМ), ингибиторы PI3K, Akt inhibitor
IV (AktI, 1 мкМ), ингибитор протеинкиназы B/Akt, и TDZD-8 (2 мкМ), ингибитор GSK-3beta.
Фотосенсибилизатор – алюмофталоцианин Фотосенс, источник света – полупроводниковый
или He-Ne лазеры (670 или 633 нм). Нейронную активность отводили внеклеточно
присасывающимися электродами и регистрировали с помощью программно-аппаратного
комплекса на базе персонального компьютера. Некроз и апоптоз определяли путем двойного
флурохромирования препарата пропидиум-иодидом, выявляющим ядра некротических
клеток, и Hoechst-33342, выявляющим фрагментированные ядра апоптозных клеток.
В темноте ингибирование PI3K или Akt не влияло на некроз нейронов и ГК и на апоптоз ГК.
TDZD-8, ингибитор GSK-3beta, втрое усиливал апоптоз и вдвое – некроз ГК, что указывает
на защитную роль GSK-3beta в нервной системе рака. Фотосенс или лазерное излучение поотдельности
не влияли на нейронную активность, но вместе (это ФД воздействие) вызывали
сначала активацию, а затем торможение и необратимое прекращение нейронной активности
в среднем за 15-20 мин. После этого развивался некроз нейронов, некроз и апоптоз
окружающих ГК. При фотосенсибилизации ингибирование PI3K с помощью LY294002 или
вортманнина, как и ингибирование GSK-3beta с помощью TDZD-8, не вызывало
достоверного изменения уровня фотоиндуцированных апоптоза и некроза ГК или некроза
нейронов. Это свидетельствует о неучастии PI3K и GSK-3beta в данных процессах.
Ингибитор AktI не влиял на импульсную реакцию нейрона и апоптоз ГК, но вдвое снижал
уровень ФД-индуцированного некроза нейронов и ГК, т.е. протеинкиназа В/Akt участвовала
в ФД-индуцированном некрозе нейронов и глиальных клеток. Это могло быть связано
с Akt-опосредованной генерацией активных форм кислорода в этих клетках.
Работа поддержана грантами РФФИ (09-04-01322) и Минобрнауки РФ (2.1.1/6185).
Влияние затемнения на уровень экспрессии гена фосфолипазы D
в однодольных и двудольных растениях
Крывуля Ирина Анатольевна (Белоруссия, Минск, ira.kryvulia@gmail.com)
Основным ферментом фосфолипидного катаболизма в растениях является фосфолипаза D
(ФлD). В условиях затемнения ФлD участвует в обеспечении энергетических потребностей
клетки путем гидролиза фосфолипидов, продукты которого затем вовлекаются в углеводный
обмен, способствуя тем самым адаптации растений к недостаточному уровню освещенности.
26