Полный текст - БГУ. Сайт биологического факультета

965-7 дней растения заражают кладоспориозом, опрыскивая их суспензиейКОНИДИЙ гриба C.fulvuт в концентрации 3 х 105шт./мл. Инокупюм готовятиз чистой культуры или листьев, пораженных определенной расой патогена,желательно с максимально широким спектром вирулентности, например1.2.3.4.5.9. Это дает возможность выявить эффективные гены устойчивости- Cj5, Сfб. Необходимо поддерживать оптимальные условия: температуру20--230, влажность воздуха 80--90 %. Через две недели оценивают по5- или 9-балльной шкале поражение фузариозом, еще через 1,5-2 неделипоражениеВТМ и кладоспориозом. Здоровые растения высаживают на постоянноеместо и в фазе завязывания плодов (период максимального проявлениясимптомов) проводят окончательную оценку устойчивости к фузариозу[186,187]. Устойчивость коллекционного, исходного материала, линий, гибридовF 1 , а также гибридного материала высоких поколений часто удобнееоценивать по отделенным органам растений - боковым побегам, листьям, стем чтобы не потерять в результате заражения оцениваемый образец. Приоценке на устойчивость к кладоспориозу по боковым побегам лучше использоватьпредварительно укорененные пасынки, образовавшиеся в пазухе6--8 листа. Загущенная посадка позволяет на небольшой площади оценитьбольшое количество образцов, обеспечивает поддержание высокой относительнойвлажности воздуха, необходимой для заражения, позволяет сохранитьреакцию целостного взрослого организма [139--141,185].При оценке устойчивости к кладоспориозу и альтернариозу по отдельнымлистьям заражают три конечные доли 3--4-го листа от верхушки растения.«Троечки» листьев раскладывают нижней стороной вверх в виде черепицына стеклах с увлажненной фильтровальной бумагой, что обеспечиваетмаксимальное сохранение влаги и экономию места. При заражении инфекциюкладоспориума наносят диффузно, пульверизатором, альтернарии -локально, пипеткой. Возможна одновременная комплексная оценка одних итех же листьев к кладоспориозу и альтернариозу. Нами установлено, что возбудителиобоих заболеваний не проявляют антагонистических свойств поотношению друг к другу in vitro и in vivo, но и не являются полностью нейтральными:гриб А. solani развивается более интенсивно и раньше колонизируетпитательный субстрат. В связи с этим при комплексной оценке необходимовначале провести опрыскивание отдельных листьев или растений встадии 3--4 настоящих листьев инокулюмом гриба С. jUlvum, а через 1Однейнанести на нижнюю сторону отделенных листьев суспензию конидийА. solani - по 1 капле на правую половину каждой листовой доли. На 17-йдень от первой инокуляции проявляются отчетливые симптомы обоих заболеваний;что позволяет провести оценку устойчивости.Грибы, вызывающие симптомы увядания, хлорозы, некрозы содержатсреди продуктов метаболизма специфические инеспецифические токсины- вещества, которые в низких концентрациях вызывают повреждениярастений. Существует обширное направление исследований, связан-ное с изучением роли токсинов в патогенезе и возможностью использованияфитотоксинов в селекции [158]. Разработаны экспресс-методы оценкинеспецифической устойчивости (толерантности) растений к фузариозу науровне мужского гаметофита (пыльцы), Нами установлено, что токсичныеметаболиты в концентрации 0,15--0,30 г/л (для возбудителя фузариоза)или разведении 1 : 3 (для возбудителя кладоспориоза) дифференцированновлияют на рост пыльцевых трубок различных сортов томата, что позволяетразличать их по уровню устойчивости. Коэффициент обратной корреляции- 0,76 для возбудителя фузариоза и 0,64--0,67 для возбудителя кладоспориозаподтверждает, что чем слабее поражается растение (спорофит),тем устойчивее к токсинам пыльца (гаметофит) [36, 162].Анализ экспериментальных данных выявил сортоспецифичную реакциюпыльцы изучаемых форм на различное содержание в питательной среде фузариевойкислоты (химически чистый препарат). Отмечен рост ингибированияпыльцы у восприимчивого сорта Перамога 165 в сравнении с фузариозоустойчивымНеinz 1370. Установлено, что содержание фузариевой кислоты в средедля проращивания пыльцы томата в пределах 0,03--0,3 г/л позволяет разграничитьсортапоустойчивостикфузариозномуувяданию[162,164,165,167].Между тем использование для отбора всего комплекса метаболитовпатогена, а не только фузариевой кислоты способствует, на наш взгляд,получению более полного представления об устойчивости образца. К томуже получение экстракта менее трудоемкий и не требующий больших затратпроцесс по сравнению с выделением чистых токсинов [162,164,165].Таким образом, способ оценки устойчивости томата к патогенномугрибу F. oxysporuт f sp. lycopersici по пыльце с использованием токсичныхметаболитов включает следующие этапы:1. Подготовка пыльцы. Цветки оцениваемых образцов томата, собранныеиз одной кисти (второй или третьей), предварительно подсушиваютв течение 3--4 ч. Из них извлекают пыльцу и делят ее на две части.2. Проращивание пыльцы Одну часть пыльцы проращивают методоммножественных висячих капель на оптимальной среде (контроль) следующегосостава: 15 % сахарозы, 0,0006 % борной кислоты, 0,5 % агар-агара и100 мл дистиллированной воды. Вторую часть (опыт) - на оптимальнойсреде с добавлением токсичного агента в дифференцирующей концентрации0,3 г/л. Инкубацию пыльцы проводят В термостате при температуре+ 28 ос в течение 21 ч, после чего фиксируют смесью Карнуа (спирт и ледянаяуксусная кислота в соотношении 3 : 1).3. Измерение длины пыльцевых трубок осуществляют с помощью окуляра-микрометрау 100проросших пыльцевых зерен в каждом варианте опыта иконтроле, Отношение Э1ПХ. величин - относительный процеит длины пыльцевыхтрубок - служит показателем фузариозоустойчивости сорта. При ЭТОМ высокоустойчивымиследует считать образцы, у которых этот показагель составляетболее чем 60 % от контроля. У практически устойчивых и слабовосприим-97