Полный текст - БГУ. Сайт биологического факультета

,.ний F 2 Перамога 165 х F77-38 было 73 устойчивых, 27 восприимчивых(х 2 == 0,21; Р == 0,6); из 68 растений F 2 CGN 15339 х CGN 15839 оказалось48 устойчивых и 20 восприимчивых образцов (х 2 == 0,71; Р == 0,4).ДИК выделяли из листьев индивидуальных образцов, идентифицированныхпо устойчивости растений томата популяции F 2 CGN 15339 CGN15839 массой от 100 до 300 мг по методике [350]. для SSR-анализа использовалиследующие праймеры, локализованные на 1 и 6-й хромосоме томата:EST253712F, TMS63F, TMS63R, SSR48F, SSR48R, SSR128F, SSRI28R.Полимеразную цепную реакцию проводили в амплификаторе «PerkinЫшег». Амплификационные фрагменты анализирвали в () %-ном полиакриламидномденатурирующем геле на секвенаторе ALFexpress 11(Amersham Pharmacia Biotech). Определение сцепления и рекомбинационныйанализ между локусом устойчивости к кладоспориозу томата и молекулярнымимаркерами осуществляли при помощи компьютерной программыМAPМAКER v.3.0.для анализа Сf-локусов были использованы праймеры 2-5 С и CF5[287], дающие при амплификации продукты определенного молекулярноговеса. Праймер 2-2CR сконструирован нами на основании данных о нуклеотиднойпоследовательности гена Cj2 [285].для определения возможного сцепления микросателлитных маркеров1 и 6 хромосом томата с геном устойчивости к кладоспориозу Сfб былопроведено сравнение электрофоретических спектров родительских формтомата, использованных для скрещивания, и образцов расщепляющейсяпопуляции F 2 (рис. 18). Для предварительного скрининга были случайнымобразом отобраны 10 устойчивых (содержащих ген Cf6) и 10 восприимчивьхх(содержащихген Cj2) растений томата.. в результате анализа полученных амплификационных фрагментовбыло найдено 3 SSR-праймера, продукты амплификации которых обнаруживалиполиморфизм между устойчивыми и восприимчивыми формами:SSR48, SSR128 и EST253 [60, 62]. Маркеры SSR48 и SSRI28, локализованныена б-й хромосоме томата, продемонстрировали наиболее тесное сцеплениес признаком устойчивости (рис. 18, 19).Данные микросателлитного анализа образцов F 2 популяций сопоставлялис результатами фитопатологической оценки индивидуальных образцовна устойчивость к кладоспориозу. Отмечено 3 рекомбнантных событиямежду молекулярным маркером и признаком устойчивости ДЛЯ маркераSSR48 и 2 для маркера SSR128, причем в одном случае рекомбинацияприсутствует по обоим молекулярным маркерам.Анализ расщепления маркеров и признака устойчивости на индивидуальныхобразцах F2 популяции с помощью программы МAPМAКERпоказал, что маркеры SSR48 и SSRI28, локализованные на 6-й хромосометомата, демонстрируют сцепление с признаком устойчивости к кладоспориозуна дистанции 3,4 и 2,2 сМ соответственно.Данные о расположении маркеров SSR48 и SSR128 на микросателлитнойкарте томата, а также сведения о генетических дистанциях междумаркерами и признаком устойчивости к кладоспориозу на образцахF2 популяции позволили установить, что исследуемый локус Сfб локализованна коротком плече хромосомы 6 томата, так же, как и кластерCj2/Cf5 (рис. 20).Рис. 18. Фрагменты, полученные в результате амплификациис праймерами SSR48. Стрелкой отмечен маркер, полиморфныймежду устойчивой и восприимчивой формами.Об раз Ц ы: R - устойчивые, S - восприимчивыеРис. 19. Фрагменты, полученные в результате амплификациис праймерами SSR128. Стрелкой отмечен маркер, полиморфныймежду устойчивой и восприимчивой формами.О бра з Ц ы: R -устойчивые, S - восприимчивые106107