Gebrauchsanweisung Setup - virion\serion

6.3.7 Einstellung der Kompensation
Erst wenn die Spannungen korrekt eingestellt worden sind, darf die Kompensation justiert
werden. Werden die Spannungen nachträglich geändert, muss die Kompensation neu
durchgeführt werden.
Mit den Lösung E und F wird die Kompensation eingestellt. Diese Einstellungen sind
notwendig, da der Fluoreszenzfarbstoff Fluoreszein, der eigentlich nur auf FL1 zu messen
sein sollte, auch auf den Detektor FL2 messbar ist. Ebenso ist die Emission von
Phycoerythrin nicht nur auf dem eigentlichen Detektor FL2 zu messen, sondern auch auf
FL1 und FLp. Dieser störende Anteil an Fluoreszenzlicht wird durch die Kompensation vom
Signal abgezogen. Die Partikel mit Farbstoff und ohne Farbstoff sind nach der
Kompensation auf einer Ebene, bzw. sind die Medianwerte der Populationen gleich.
Die Kompensation lässt sich über die Medianwerte der Partikelpopulationen berechnen. Es
ist genau darauf zu achten, welche Werte für die Berechnung verwendet werden. Als
Formel für die Berechnung gilt:
Kompensation: FLa – x% FLb
x%=(Median apositiv–Median anegativ)/(Median bpositiv–Median bnegativ)
positiv = fluoreszenzmarkierte Partikel (rechts oben im Diagramm)
negativ = nicht markierte Partikel (links unten im Diagramm)
Um die Statistik der Partikelpopulationen zu erhalten, wird die jeweilige Lösung ca. 30
Sekunden gemessen und die aus dieser Messung erhaltenen Medianwerte für die
Rechnung verwendet. Dabei muss jede Partikelpopulation mindestens aus 100 Partikeln
bestehen.
Alternativ kann auch im Setup-Mode gemessen werden und die Kompensation so lange
variiert werden bis die Medianwerte der beiden Populationen gleich sind.
Eine optimale Kompensation ist erreicht, wenn die Mediane der Partikelpopulationen gleich
sind, bzw. wenn mit der Formel ein Wert kleiner als 0,1 % erhalten wird.
Abb. 5: Diagramm FL2 vs. FLp. Im linken Diagramm sind die Partikel zu wenig kompensiert.
Im mittleren Diagramm sind sie richtig kompensiert und im rechten überkompensiert.
deutsch 12