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Materialien und Methoden
Tabelle 1) benötigt werden, bei der Vorlage des Reaggregationsmediums
berücksichtigt. Die Kontrollkulturen enthalten ausschließlich das
Reaggregationsmedium. Bei Behandlungen mit AAA wird die entsprechende
Verdünnung von AAA durch Zugabe der Zellsuspension in der Kulturschale
vorgelegt. Das Volumen der Zellsuspension wird hierbei von der Anzahl des
Reaggregationsmediuns abgezogen.
Wachstumsfaktoren Konzentration
GDNF
BDNF
PEDF
50 ng/ml
10 ng/ml
50 ng/ml
Tabelle 1 Eingesetzte Konzentrationen der
verwendeten Wachstumsfaktoren.
Die angesetzten Kulturen werden im Brutschrank bei 5% CO 2 , 95%
Luftfeuchtigkeit und 37°C unter permanenter horizontaler Rotation (75 rpm)
bebrütet. Das Reaggregationsmedium wird jeden zweiten Tag gewechselt, wobei
zu den behandelten Rosettensphäroiden der entsprechende Wachstumsfaktor
oder Toxin (AAA) bei jedem Mediumwechsel erneut zugegeben wird.
3.2.5 Explantat-Kultur
Für Explantat-Kulturen wurden Eier am entsprechenden embryonalen Tag (meist
E6), wie unter Gliederungspunkt 3.2.2 beschrieben, geöffnet und die Augen in
kaltem F12 gesammelt. Für die Präparation der Explantate wurden die Augen
einzeln in calciumfreies HBSS überführt. Mit einer feinen Schere wurde das Auge
entlang der Ora serrata geöffnet (Abbildung 9) und der gesamte ausgeschnittene
Bereich, samt Linse und Glaskörper, mit einer feinen Pinzette aus dem Auge
gehoben. Als nächstes wurde die gesamte Retina vorsichtig in einem Stück vom
RPE getrennt. Hierbei unterstützt die Eigenschaft des calciumfreien HBSS die
Abtrennung der Retina vom Pigmentepithel. Der Retina-`Becher´ wurde mit einer
feinen Schere in zwei gleiche Teile geschnitten, sodass die Teilung durch den
zentralen Bereich der Retina verläuft. Der zentrale Bereich ist an der `Becher´-
Außenseite durch den Rest des Sehnervs gekennzeichnet. Die einzelnen
Explantate wurden in das entsprechende Medium überführt und bis zur Fixierung
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