Protokoll 1 (Wallner)

Modul Immunologie Januar 2013
Diskussion
Im Vergleich zu den Ergebnissen der anderen Gruppen hätten wir einen Wert zwischen 10%
und 20% erwartet. Die 4,3% aus der Grafik entsprechen den ungefähren 5% der Schätzung
aus den Rohdaten und es ist somit ein Rechenfehler auszuschließen. Pipettierfehler oder
eine falsche Verdünnungsreihe könnten die Ursache für den geringen Prozentwert sein.
Wie erwartet zeigt sich eine asymptotische Annäherung an den Maximalwert. Dieses Plateau
ist definiert durch die Menge an Capture-Antikörper mit denen die Platte inkubiert wurde.
Das untere Plateau ergibt sich durch die geringe Menge an Antigenen, da erst ab einer
bestimmten Menge ein messbarer Effekt eintritt.
In der Grafik erkennt man zwei lineare dynamische Bereiche, mit denen wir messen und
quantifizieren können.
3. RBL Assay
Einleitung
In diesem Versuch wollen wir die physiologische Degranulation von Basophilen über einen
RBL-Assay nachweisen und anhand der Ergebnisse den Anteil von Bet v 1 im Pollenextrakt
quantifizieren.
Material und Methoden
Geräte
Pipetten (10er, 200er, 1000er)
Durchlichtmikroskop
Eppendorf-Gefäße (1,5ml)
Neubauer Zählkammer
Zellkulturschalen
15ml Röhrchen
96er well Mikrotiterplatte (Nunc Nunclone)
96er well Mikrotiter platte (Greiner BioOne)
Folie (Nunc)
Medien und Lösungen
Genaue Zusammensetzung siehe Praktikumsunterlagen zum Übungsteil Wallner, Modul Immunologie 2013
RBL-Medium (RPMI, FCS, L-Gluatamine, Sodium Pyrovate, 2-MerkaptoEtOH, Pen/Strep)
Tyrode’s buffer (Tyrode salts according to GIBCO, HEPES, NaHCO 3 )
Citrate buffer (Citric acid, NaOH)
4-NAG (4-NAG, Citric buffer)
Glycine buffer (Glycine, NaCl)
TE-Puffer (Trypsin/EDTA)
DPBS
Universität Salzburg 9 / 13