Die regulatorische Rolle von Cortisol und Wachstumshormon auf ...

Diskussion
al., 2000; Skapenko und Schulze-Koops 2007).
Im vorliegenden Studiendesign wurde die Untersuchung von stimulierten und
aktivierten Vollblutproben am Durchflusszytometer gewählt. Der Nachweis reaktiv
gebildeter Zytokine nach Antigenstimulation ist jedoch auch durch die Verwendung
mononukleärer Zellen des peripheren Blutes (Peripheral Blood Mononuclear Cell,
PBMC) möglich. In beiden Varianten werden die Zellen stimuliert, fixiert,
permeabilisiert und die dann exprimierten Zytokine mittels monoklonaler
fluoreszierender Antikörper markiert und anschließend am Durchflusszytometer
dargestellt. Studien belegen, dass beide Verfahren vergleichbare
Analysemethoden zur Zytokinmessung per Durchflusszytometer darstellen (De
Groote et al., 1992; Jason und Larned 1997; McNerlan et al., 2002; Yaqoob et al.,
1999), auch wenn in Untersuchungen von Waldrop und Mitarbeitern die Frequenz
der Zytokinexpression bei Vollblutstimulationen im Vergleich zu PBMC höher war
(Waldrop et al. 1997).
In der vorliegenden Arbeit wurde die Vollblutanalyse verwandt, um ungewollte
Zellaktivierungen, die eventuell durch konventionelle Separationsvorgänge
verursacht werden könnten, zu umgehen. Eine Zell-Separation könnte eine
Abtrennung der T-Zellen von ihrem umgebenden hormonellen Milieu bedeuten,
welches jedoch gerade im Rahmen dieser Untersuchung von Interesse war
(Schultz et al., 2002). Zudem wird durch Nutzung von Vollblutproben eine
Reproduzierbarkeit sowie die Vergleichbarkeit mit bereits vorausgegangenen
Studien unserer und anderer Arbeitsgruppen zu dieser Thematik ermöglicht
(Dimitrov et al., 2009; Duramad et al., 2004; Lange et al., 2006a; Matalka und Ali
2005; Visser et al., 1998).
Die im Rahmen dieser Arbeit verwandte Zytokinbestimmung mittels
Durchflusszytometer ist eine anerkannte Methode zur Erfassung der Th1/Th2-
Immunaktivität und ermöglicht detaillierte Aussagen über das Zytokinmuster
(Arora 2002; Brown und Wittwer 2000; Longobardi-Givani 1992; Pala et al., 2000).
Die FACS setzt jedoch eine Stimulation der Zellen vor der Messung voraus,
wodurch eine spontane Zytokinmessung nicht möglich ist. Ein weiterer Nachteil
dieser Methode ist, dass zur intrazellulären Akkumulation der Zytokine Brefeldin A
eingesetzt wird, welches zugleich verhindert, dass die stimulierten Zellen
Rezeptoren exprimieren oder autokrine bzw. parakrine Mediatoren freisetzen.
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