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Konzentrationen der Ampholyte muß gleich im Gel sein,sonst treten Lücken im pH Spektrum auf.2% Ampholyte im GelNach anlegen des elektrischen Feldes richten sich diegeladenen Teilchen aus und bilden den GradientenDie Trägerampholyte mit dem niedrigsten pI wandern bisan das anodische Ende des Gels, die Ampholyte mitdem höchsten pI wandern an das kathodische Ende.Der Gradient kann nach langer Focussionszeit anfangenzu driften (Kathodendrift). Banden werden unscharf,basische Proteine gehen verloren.Vorteil: Trägerampholyte wirken als Zwitterionen und haltenProteine in LösungDr. Cornelia KasperTCI Institut fürTechnische Chemie
Immobilisierte pH-Gradienten(IPG)IPG sind in die Gelmatrix einpolymerisiertEingesetzt werden dazu bifunktionelle ImmobilineH2C=CH-C=O C=O (–NHR)(Immobiline sind Acrylamidderivate und somit schwacheSäuren oder schwache Basen.Definition der Immobiline erfolgt über ihre pK-WerteMan benötigt zwei unterschiedliche Immobiline.Der zupuffernde pH-Wert ergibt sich aus demMischungsverhältnis.Dr. Cornelia KasperTCI Institut fürTechnische Chemie
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