Lokalisation von mRNA-Transkripten auf Gewebeschnitten des ...

2.9 Tiere
Material und Methoden
Als Versuchstiere wurden weibliche Wistar-Ratten verwendet. Die Ratten stammten
vom Zentralen Tierlabor (ZTL) der Universität Heidelberg und wurden dort unter
standardisierten Bedingungen in einem vollklimatisierten Raum bei künstlichem Tag-
Nacht-Rhythmus gehalten.
Es wurden drei Wochen alte Wistar-Ratten für die Präparation von Nasen und ein
Jahr alte für die Präparation der Conchien verwendet. Die Nasen dienten für
Gewebeschnitte, die Conchien für die RNA-Isolierung.
OMP-GFP-Mäuse des M55/Cre7-Stammes (Potter et al., 2001) wurden
freundlicherweise von Priv.-Doz. Dr. Jörg Strotmann (Universität Hohenheim) zur
Verfügung gestellt.
2.10 Präparation des olfaktorischen Epithels für Nasengewebeschnitte
Vor der Gewebepräparation wurden die Tiere durch eine CO2-Begasung getötet und
dekapitiert. Daraufhin wurden das Fell und der Unterkiefer vom Kopf entfernt, sowie
der posteriore Teil des Oberschädels durch einen koronalen Schnitt hinter dem
Siebbein abgetrennt. Die Nasenspitze wurde posterior der Schneidezähne koronal
abgetrennt, um das Abstumpfen der Stahlmesser am harten Dentin der
Schneidezähne zu vermeiden. Weiterhin wurde durch einen Sagitalschnitt des
Schädeldachs von posterior nach anterior über das Siebbein hinweg ein Zugang zur
Nasenhöhle geschaffen. Dies ist nötig um der Luft das Entweichen und dem Fixativ
das Eindringen in die Nasenhöhle zu ermöglichen. Die gesamte Präparation erfolgte
bei Raumtemperatur.
2.10.1 Herstellung beschichteter Objektträger
• Gelatine beschichtete Objektträger
SuperFrost Objektträger (Menzel) wurden über Nacht in 100 % Ethanol gelagert. Am
nächsten Tag wurden diese in destilliertem Wasser gewaschen und in 0,5 % Gelatine
(w/v) bei 40-50°C gegeben. Nach 2-3 h wurden die Objektträger aus dem
18