Morphologische und DNA-analytische Untersuchungen am - OPUS ...

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Material 40 Kühlschrank Fa. Bosch Magnetrüher M 21 GLW Mikroschraubröhrchen Fa. Sarstedt PAG-Elektrophoresegeräte Multiphor II Electrophoresis Unit Fa. Pharmacia, Freiburg Macrodrive 5 Power Supply Fa. Pharmacia, Freiburg Mulitemp Thermostatic Circulator Fa. Pharmacia, Freiburg pH Meter pH256 WTW Photometer Fa. Eppendorf Pipettenspitzen (verschiedene Volumina) Fa. Eppendorf Reaktionsgefäße Standard und Safelock Fa. Eppendorf Schüttler Vortex Genie 2 Fa. Bender & Hobein Taumelrotator, horizontal Fa. Heidolph Tischwaage Fa. Sartorius Zentrifuge Mikroliter Fa. Hettich, Tuttlingen Zentrifugenröhrchen Fa. Greiner
Methoden 41 3 Methoden In diesem Kapitel wird das Untersuchungsmaterial sowie die experimentelle Vorgehensweise bei den Untersuchungen beschrieben. Im ersten Teil wird die Verfahrensweise zur Herstellung von histologischen Schnitten durch die Kopfhaut erläutert. Im zweiten Teil wird die Methode der DNA-Extraktion und Typisierung aus Haarschäften und -wurzeln vorgestellt. Das Verfahren zur statistischen Analyse des aus den DNA-Profilen gewonnenen Datenmaterials der untersuchten Stichproben wird im Kapitel 3.5 erläutert. 3.1 Herstellung histologischer Schnittpräparate durch die Kopfhaut In der folgenden Arbeit wird mit ausgewählten Fixationen und Färbemöglichkeiten der Versuch unternommen, in histologischen Schnitten durch die Kopfhaut Haare auf intakte Zellkerne und darin enthaltene DNA zu untersuchen. Dafür wurden sowohl Längs- als auch Querschnitte durch die Haarstrukturen angefertigt, die mit der Hämatoxylin-Eosin- und der Methylgrün-Pyronin-Methode angefärbt wurden. Vorher mussten die Präparate in speziellen Fixierungslösungen wie z.B. Formalin und der Carnoyschen Flüssigkeit, vorbehandelt werden. 3.1.1 Zuschnitt der Gewebeproben Kopfhaut lässt sich am besten im gefrorenen und unfixierten Zustand z. B. mit einem Rasiermesser zuschneiden. Um exakte Querschnitte durch die Haare zu erhalten darf die Schnittführung mit dem Mikrotom nicht einfach parallel zur Haaroberfläche erfolgen, denn dies würde Schrägschnitte ergeben. Vielmehr muss mit der Lupe der Haarverlauf an der Schnittfläche kleiner quadratischer Kopfhautstücke (1,5 x 1,5 cm) festgestellt werden. Nun wurde einseitig die Kopfschwarte so weit abgetragen, dass in den Gewebestücken die Haare senkrecht stehen. Ein solcher Flachschnitt ergab Querschnitte durch die Haare in den verschiedenen Höhen ihrer Einpflanzung in der Kopfhaut.
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