Morphologische und DNA-analytische Untersuchungen am - OPUS ...

Methoden 42
Längsschnitte durch die Kopfhaut sind sehr schwer zu realisieren, vor allem wenn das
Haar von der Haarzwiebel bis zum Austritt aus der Kopfhaut getroffen werden soll. Die
Seitenfläche der Gewebestücke muss exakt mit dem Verlauf des Haares identisch sein.
Beim Schneiden orientiert man den Block so, dass zuerst der Bulbus und zuletzt der
Haarschaft vom Messer getroffen wird. Dazu wurde die Kopfhaut in 1,5 x 0,5 cm große
rechteckige Stücke zugeschnitten. Noch vor der Färbung konnte unter dem Mikroskop
das Ergebnis der Schnittführung begutachtet werden.
3.1.2 Fixation
Folgende Fixationslösungen wurden verwendet:
- 10 %-ige Formalinlösung ® Hämatoxylin-Eosin-Färbung
- Carnoysche Flüssigkeit ® Methylgrün-Pyronin-Färbung
Die verwendete 10 %-ige Formalinlösung (100 ml 10 % Formalinlösung + 900 ml
destilliertes Wasser) benötigte zur vollständigen Fixation der 1,5 x 1,5 cm und 1,5 x 0,5
cm großen Gewebsstücke ca. 48 Stunden. Die Lagerung erfolgte bei Raumtemperatur
(21 °C). Die besten Fixationsergebnisse wurden bei einem pH-Wert von 7,0 erreicht.
Formalinpigment bildete sich bei einem pH-Wert unter 5,6. Ein alkalisches Hämatin
wird bei einem pH-Wert von über 8,0 gebildet.
Beide Pigmente konnten entweder mit einer alkoholischen Picrin-Säure oder einer
Lösung von 1% Kaliumhydroxyd in 80 % Alkohol gelöst werden (cave! Picrin-Säure
nie im getrockneten Zustand lagern, da hoch explosiv!).
Die Carnoysche Flüssigkeit (60 ml 100 % Ethanol + 30 ml Chloroform + 10 ml
Eisessig) dringt sehr rasch in das zu fixierende Gewebe ein (ca. 2,9 mm in vier
Stunden), sodass für die 1,5 x 1,5 cm großen Gewebestücke eine Fixationszeit von acht
Stunden und für die 1,5 x 0,5 cm großen Gewebestücke eine Fixationszeit von 3,5
Stunden veranschlagt wurde. Der Aufenthalt in der Lösung sollte nicht länger
ausgedehnt werden als zur völligen Durchdringung notwendig. Bei zu langer
Einwirkzeit verstärkten sich die Schrumpfungen und die Präparate werden zu hart. Zu
beachten ist außerdem, dass Carnoysche Flüssigkeit Erythrozyten hämolysiert. Auch