PDF Download - Laborwelt

RNA-Interferenz
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B L I T Z L I C H T
MISSION shRNA-Library:
die nächste Generation der
RNA-Interferenz
Stephanie Uder, Henry George und Betsy Boedeker,
Sigma-Aldrich Corporation, St. Louis, MO, USA
Die RNA-Interferenztechnologie ist eine der bahnbrechenden biologischen Entwicklungen der
vergangenen zehn Jahre und hat die biologische Grundlagenforschung sowie die Untersuchung
der Genfunktionen revolutioniert. Doch auch für die Zukunft eröffnet sie vielversprechende Perspektiven
für das Drug Discovery und die Entwicklung neuer Therapeutika. In den vergangenen
Jahren haben synthetische siRNAs die genetischen Werkzeuge für die Untersuchung eukaryotischer
Systeme geliefert und diesen bis dahin schwierigen Prozeß vereinfacht. Allerdings
hat die Suche nach Untersuchungsmethoden für Systeme mit unterschiedlicher Komplexität
auch Probleme aufgeworfen. Vorklonierte MISSION shRNAs können diese Schwierigkeiten
umgehen, indem sie ein System für eine langfristige Inaktivierung und phänotypische Beobachtung
liefern. Außerdem steht ein Plasmid zur unbegrenzten Vermehrung zur Verfügung.
Das System beinhaltet Optionen für die transiente oder stabile Transfektion und die Fähigkeit
zur Erzeugung lentiviraler Partikel zur Infektion von primären Zellen, sich teilenden Zellen
und sich nicht teilenden Zellen – verbunden mit der Integration in ihr Genom.
RNAIGEXGG0905L4DE.qxd 02.08.2005 17:08 Kennziffer Uhr 15 Seite LW 05 1·
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Die RNA-Interferenz-Technologie hat sich
– nach einer 1998 erstmals an Caenorhabditis
elegans durchgeführten grundlegenden
Studie 1 – in rasantem Tempo zu einem heute
revolutionären Hilfsmittel zur Untersuchung
von Genfunktion, Stoffwechselwegen und
der Physiologie von Krankheiten entwikkelt.
In früheren Studien an Petunien wurde
ein Phänomen („Cosuppression“ genannt)
beobachtet, bei dem die Überexpression
eines homologen Transgens dazu führte,
daß sowohl das Transgen als auch das endogene
Gen inaktiviert wurden 2 . Aus den
bahnbrechenden Ergebnissen der späteren
Studien an C. elegans ging eindeutig hervor,
daß doppelsträngige RNA (dsRNA) mit der
Genfunktion interferiert. Diese Entdeckung
wurde als RNA-Interferenz – kurz RNAi
– bezeichnet. Die Weiterentwicklung und
Verfeinerung der RNAi-Technologie verlief
in den letzten Jahren geradezu explosionsartig.
Wir kennen nun den grundlegenden
Mechanismus des endogenen RNAi-Wegs
und wissen, daß der Weg in den meisten
Eukaryoten vorhanden ist 3 . Zudem ist
bekannt, wie die Zellmaschinerie genutzt
werden kann, um die Proteinexpression gezielt
stillzulegen. Es wurden wichtige Regeln
und Parameter für die Verwendung kleiner
interferierender RNAs (siRNAs) von weniger
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siRNA technology licensed to QIAGEN is covered by various patent applications, owned by the
Massachusetts Institute of Technology, Cambridge, MA, USA and others. QuantiTect Primer Assays
are optimized for use in the Polymerase Chain Reaction (PCR) covered by patents owned by Roche
Molecular Systems, Inc. and F. Hoffmann-La Roche, Ltd. No license under these patents to use the
PCR process is conveyed expressly or by implication to the purchaser by the purchase of this product.
A license to use the PCR process for certain research and development activities accompanies the
purchase of certain reagents from licensed suppliers such as QIAGEN, when used in conjunction with
an Authorized Thermal Cycler, or is available from Applied Biosystems. Further information on
purchasing licenses to practice the PCR process may be obtained by contacting the Director of
Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404 or at Roche
Molecular Systems, Inc., 1145 Atlantic Avenue, Alameda, California 94501.
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LABORWELT 6. Jahrgang | Nr. 5/2005 | 11
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