peste porcina clasica: diagnostico y caracterizacion ... - Inicio - CENSA

La sensibilidad y especificidad diagnósticas relativas de ambos ensayos se evaluaron frente a
un conjugado fluorescente policlonal específico de referencia (CISA-INIA/Valdeolmos, Madrid,
España) en células infectadas por diferentes cepas/aislados y en cortes por congelación de
órganos de animales que presentaron signos clínicos y lesiones compatibles con PPC y de
animales procedentes de una piara no vacunada y sin historia de la enfermedad.
La repetibilidad del ensayo (ver acápite 3.1.7) se evaluó con 10 muestras de cortes de
órganos positivas y 10 negativas por triplicado, durante tres días.
3.3. Aislamiento viral.
El procedimiento de aislamiento viral se estableció básicamente de acuerdo a Terpstra,
1996, con modificaciones orientadas a optimizar las condiciones del ensayo.
3.3.1. Preparación de los cultivos celulares: Se preparó una suspensión de
células PK-15 a una concentración de 2 x 10 6 células/mL en medio MEM de
crecimiento y se dispensó 1 mL de la misma por tubo de cultivo celular con y sin
cubreobjetos.
3.3.2. Inoculación de los cultivos celulares: Se evaluaron dos procedimientos de
inoculación de la muestra - preparada según se describe en el acápite 3.1.4. - en los
cultivos celulares, con vistas a facilitar el revelado posterior de la multiplicación viral. Por
una parte, se inocularon directamente 0,2 mL de muestra/tubo de cultivo, sobre células