peste porcina clasica: diagnostico y caracterizacion ... - Inicio - CENSA

Para definir la sensibilidad analítica del ensayo de RT-PCR en sobrenadantes de cultivos
celulares infectados, se realizaron diluciones seriadas base 10 de la cepa Alfort con título
conocido, en medio de cultivo. Para ello se partió de ARN extraído de cada dilución de la
suspensión viral.
Por otra parte, para determinar la sensibilidad analítica del ensayo realizado a partir de
extractos de órganos, se infectó experimentalmente un extracto de órgano negativo a PPC
con una suspensión de la cepa Alfort de título conocido y se realizaron diluciones base 10
en este extracto, de cada una de las cuales se realizó la extracción del ARN.
Para evaluar la especificidad analítica se empleó como molde de la reacción de RT-PCR,
ARN extraído de cepas/aislados de PPC y BVD.
3.4.4. Evaluación de criterios sobre el desempeño del ensayo: Para evaluar la
sensibilidad y especificidad diagnósticas relativas se empleó el ensayo de RT-PCR frente
a la IFD, en un total de 25 extractos de órganos, procedentes de animales sacrificados por
presentar signos clínicos y lesiones compatibles con PPC, y 7 de animales procedentes de
una piara no vacunada y sin historia de la enfermedad. Para ello se emplearon tres tipos
de órganos diferentes, amígdala, bazo y ganglio linfático.
Además, para evaluar el potencial del procedimiento como instrumento para el diagnóstico
en animales vivos, se analizaron muestras de suero y buffy coat provenientes del
experimento descrito en el epígrafe 3.1.5. Estos resultados fueron comparados con los
obtenidos a través de un ensayo de ELISA (Rhône-Mérieux, Francia), para la detección
de antígenos del virus de la PPC, en estas muestras.
La repetibilidad del ensayo (ver acápite 3.1.5) se evaluó con 10 muestras de ARN,
extraído a partir de sobrenadantes de cultivo de células infectadas con el virus de la PPC y