peste porcina clasica: diagnostico y caracterizacion ... - Inicio - CENSA

Una vez estandarizadas las condiciones del ensayo se evaluaron los sueros hiperinmunes
obtenidos, se titularon para usarlos como suero detector, se escogió el de mayor título y se
evaluaron las siguientes modificaciones: sustitución del sistema de revelado indirecto -
suero detector / Proteína A – Peroxidasa (Sigma) - por el conjugado específico de la
inmunoperoxidasa directa (CENSA/C-kure) para acortar el ensayo una hora; conjugado
anti-IgG de cerdo (CENSA/ C-kure) / Peroxidasa en lugar de Proteína A - Peroxidasa;
dilución más adecuada de las muestras para lograr la detección de los sueros débiles
positivos; empleo de las células PK-15, en monocapa o recién sembradas, para tratar de
acortar el ensayo 24-48 horas. Todas estas modificaciones se evaluaron utilizando 10
sueros positivos y 10 negativos.
Se evaluó la especificidad analítica del ensayo con 60 sueros de bovino reactores por
seroneutralización a dos cepas de BVDV (NADL y Oregon).
3.5.2. Evaluación de criterios sobre el desempeño del ensayo: Se evaluaron la
sensibilidad y especificidad diagnósticas (ver acápite 3.1.7) con 70 sueros de cerdo
experimentalmente infectados (ver acápite 3.1.6) y 20 sueros negativos de estos animales
antes de ser infectados, los cuales provenían de madres no vacunadas de piaras sin
historia de la enfermedad. Estos sueros fueron además evaluados por un ELISA para la
detección de anticuerpos a pestivirus (Rhône- Mérieux, Francia).
Se evaluaron la sensibilidad y especificidad diagnósticas relativas (ver acápite 3.1.7) frente
a dos juegos de ELISA comerciales, uno para la detección de anticuerpos específicos al
virus de la PPC, CEDITEST-CTB/ELISA, ID-DLO, Holanda, con 30 sueros de cerdo y
otro para la detección de anticuerpos a pestivirus, CIVTEST HC/PPC, HIPRA, S.A.,
España, frente a 225 sueros de cerdo. Los sueros de cerdo empleados correspondían a
animales de diferentes edades y provenían de una piara vacunada y otra no vacunada.
Para evaluar la repetibilidad (ver acápite 3.1.7), se utilizó la forma indirecta de revelado
que incluye suero detector /Proteína A (Sigma), con 40 sueros de cerdos positivos (hijos