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INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL
ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA
4. Los pacientes estuvieron de acuerdo en participar en el estudio y firmaron un
consentimiento informado con base en la Declaración de Helsinki de Estudios
de Experimentación en Humanos de 1996 y el Código de Nuremberg.
5. En la cirugía de descompresión de túnel del carpo se procedió a tomar una
biopsia de la zona de fibrosis adyacente al ligamento transverso del carpo y
los tendones flexores, encontrada de 5 mm de diámetro.
6. El tejido obtenido se mantuvo en condiciones de asepsia y se transportó en
un tubo Falcón estéril de 50 ml con formaldehido al 4 % , de la muestra de
cada tejido se dividió en cinco partes a diferentes concentraciones del fármaco:
25%, 50%, 75% y 100% y una de ellas se quedó sin tratamiento (1ml en
cada tubo).
Parte 2.
La población celular de estudio fueron fibroblastos obtenidos a partir de una
muestra de ligamento transverso del carpo se procedió con las muestras a
realizar la Inmunohistoquímica del siguiente modo:
a) Se realizó la desparafinación de 60 a 65° de 40 a 70 minutos, 20 minutos
horizontales y 20 minutos verticales.
b) Se hidrato en el tren a base de tres baños de xilol a 8 minutos cada uno, dos
baños de etanol al 100% y se enciende en baño maría, se da un baño de
etanol al 90% por 5 minutos, otro baño de etanol al 70% por 5 minutos se
calienta con citrato y posteriormente se da un baño de agua destilada.
c) Para la recuperación de antígenos con el citrato de sodio (pH 6.0 al 0.01M)
por 25 minutos en baño maría en ebullición leve, seguido de tres baños de PBS
1% 5 minutos cada uno en agitación a 130 RPM.
d) Se eliminó la Peroxidasa endógena, Met OH/H2O2 (45ml/5ml),(27ml/3ml)
dos baños de 15 minutos cada uno en agitación a 130 RPM.
e) Para Lavados, se dió un baño con agua destilada por 5 minutos a 130 RPM
(agitación) se da otro baño con PBS (Phosphate Buferred Solution) por 5
minutos a 130 RPM (agitación).
f) Se realizó el bloqueo con marcación con lápiz hidrofóbico para delimitar el
tejido. Suero de cerdo2% en agitación lenta por una hora en cámara húmeda
(20RPM).
g) 1er Anticuerpo. En Cámara húmeda, en agitación lenta (20RPM) toda la
noche.
h) Se dan cinco baños de PBS 8 minutos cada uno en agitación a 130RPM.
8. 2do Anticuerpo. Link amarillo a 30 minutos en agitación lenta (20 RPM) en
cámara.
9. Lavados. Tres baños de PBS 5 minutos cada uno en agitación a 130 RPM.
10. Streptavidina . Rojo a 30 minutos en cámara húmeda.
11. Lavados. Tres baños de PBS 5 minutos cada uno en agitación a 130RPM
12. Revelado. DAB (diaminobencidina) CANCERIGENO-CROMOGENO
DAKO.
13. Se realizó la Contratinción con hematoxilina y se lavó con agua corriente.
14. Deshidratación. En tren de reversa con agua destilada 1 baño cada uno, y
otro con etanol al 70, 90,100% y otro baño con xilol 5 minutos cada uno.
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