notice technique - Biocentric

Troubleshooting
Durchweg schwache oder gar keine Banden (inkl. Konjugatkontrolle)
– Raumtemperatur zu niedrig oder Reagenzien nicht auf Raumtemperatur äquilibriert.
– CON-C und/oder SUB-C nicht oder in zu geringer Menge eingesetzt.
Schwache oder keine Banden mit Ausnahme der Konjugatkontrolle
– Qualität und/oder Quantität der isolierten DNA lassen keine effiziente Amplifikation
zu. Amplifikationsprodukte in einem Gel überprüfen. Falls kein Amplifikat
sichtbar ist, DNA-Isolierung und -Amplifikation wiederholen; evtl. eine andere
DNA-Isolierungsmethode einsetzen. Bitte beachten Sie, dass die Amplifikationsreaktion
auch durch zu große Mengen an bakteriellem Material gehemmt werden
kann.
– Inkubationstemperatur zu hoch.
Inhomogene Färbung
– Membranstreifen zeitweise nicht vollständig eingetaucht.
– Wanne während der Inkubation nicht ausreichend bewegt.
Hohe Hintergrundfärbung
– CON-C und/oder SUB-C zu konzentriert eingesetzt.
– Unzureichend gewaschen.
– Waschlösungen zu kalt.
Unerwartetes Ergebnis
– Inkubationstemperatur zu niedrig.
– Hybridisierungspuffer und/oder Stringent-Waschlösung nicht ausreichend erwärmt
oder nicht ausreichend gemischt.
– Kontamination der isolierten DNA oder der Amplifikationsreagenzien durch zuvor
isolierte oder amplifizierte DNA. Bei einer Kontamination der Amplifikationsreagenzien
zeigt auch eine mitgeführte Negativ-Kontrollprobe ein entsprechendes
Bandenmuster.
– Kontamination benachbarter Kavitäten während der Zugabe von Hybridisierungspuffer.
– In Abhängigkeit von der Menge an eingesetzter amplifizierter DNA und den speziellen
Reaktionsbedingungen kann es zu einer starken und schnellen Farbreaktion
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