notice technique - Biocentric

GenoType ® EHEC
Test de Genética Molecular para identificación de los
genes de las Shigatoxinas stx1 y stx2, el Gen eae, y el
Gen ipaH
Metodología
El kit GenoType ® EHEC está basado en la tecnología DNA•STRIP ® y permite la
identificación combinada de los genes stx1 y stx2 de la Shigatoxina, del gen eae, y
del gen ipaH.
El procedimiento completo se divide en tres pasos : aislamiento de DNA procedente
de cultivo (crecimiento reciente en placas de cultivo; los reactivos necesarios no se
suministran), una amplificación múltiplex con primers marcados con biotina (la DNA
polimerasa termoestable no se incluye), y una hibridación reversa.
La hibridación incluye los siguientes pasos : desnaturalización química del producto
a amplificar, hibridación de amplicones en una sola cadena, marcados con biotina,
a sondas unidas a membrana, lavado astringente, adición de conjugado de fosfatasa
alcalina/streptavidina (AP), y una reacción de tinción mediada por AP. Una plantilla
asegura la interpretación sencilla y rápida del esquema de bandas obtenido.
Almacenamiento y Precauciones
A la recepción, almacenar el Primer/Mezclas de Nucleótidos (PNM EHEC 1 y PNM
EHEC 2) a una temperatura de 2–8°C y aislado de cualquier fuente potencial de
contaminación de ADN. Si se requiere almacenamiento durante más de 4 semanas,
almacene a –20ºC. A fin de evitar congelaciones y descongelaciones repetidas, alicuote
el PNM. Almacene el resto de los componentes del kit en 2–8°C. No utilice los
reactivos después de su fecha de caducidad. No mezcle reactivos de diferentes
números de lote.
Las muestras de pacientes deben siempre considerarse como potencialmente infecciosas.
Las muestras procedentes de pacientes de riesgo han de ser etiquetadas
y manipuladas bajo condiciones de seguridad. Observe todas las normas medioambientales
y de seguridad, tanto federales, estatales como locales. Lleve siempre
guantes y ropa adecuados.
El tratamiento y preparación de la muestra, incluyendo el paso de inactivación por
calor, deben ser llevados acabo en una cabina de seguridad de clase II. Antes del
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