notice technique - Biocentric

2. Lave las colonias, obtenidas en una placa que presente un buen crecimiento (“en
césped”), con 1,5 ml de solución estéril de ClNa al 0.9%, pipetee la suspensión
en un nuevo tubo y mezcle bien.
3. Incube la suspensión en un bloque de calefacción a 95°C durante 10 min.
4. Centrifugue 5 min a velocidad máxima en una centrífuga de laboratorio estándar
y transfiera el sobrenadante a un nuevo tubo. Utilice 5 µl del lisado para la amplificación
(diluya, si fuera necesario).
La evaluación del equipo GenoType ® EHEC kit se llevó a cabo utilizando el método
anteriormente mencionado.
A continuación, se describe otro método de cultivo y aislamiento de ADN :
1. Inocule un caldo de MacConkey con una cantidad de heces del tamaño de un
guisante o bien, sí las heces son fluídas, mediante un asa de inoculación de 10 µl.
Incube de un día para otro en estufa a 35 +/-2°C.
2. Siembre el caldo incubado en una placa de agar MacConkey con un asa de inoculación
de 10 µl. Incube de un día para otro a 35 +/-2°C.
3a. Recoja las colonias crecidas en la placa mediante una torunda de algodón estéril,
previamente humedecida con agua (para uso en biología molecular). Eluir el
contenido de la torunda en un tubo con 500 µl de agua (ver más arriba).
3b.Lave las colonias, obtenidas a partir de la placa, con 1,5 ml de solución salina
estéril al 0.9%, transfiera a un tubo y mezcle bien. Centrifugue a 8.000 x g durante
5 min en una centrífuga de sobremesa y deseche el sobrenadante. Resuspenda
el precipitado sólido (pellet) del fondo en 300–500 µl de agua (para uso en
biología molecular) y mezcle en un agitador tipo vórtex.
4. Incube la suspensión obtenida en 3a) ó en 3b) en un bloque de calefacción a 95ºC
durante 15 min.
5. Centrifugue durante 5 min a velocidad máxima en una centrífuga de sobremesa
y, finalmente, transfiera el sobrenadante a un nuevo tubo. Para el proceso de
amplificación, utilice 5 µl del lisado (diluya, si fuera necesario).
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