notice technique - Biocentric

testare, aggiungere 10 µl di reagente concentrato in 1 ml di tampone. Diluire CON-C
ogni volta prima del test. Il SUB-C diluito è stabile per 4 settimane a temperatura
ambiente e protetto dalla luce.
Le due reazioni di amplificazione per ciascun campione (generate rispettivamente
con PNM EHEC 1 e PNM EHEC 2) vengono ibridizzate insieme su un’unica striscia!
1. Dispensare 20 µl di soluzione di denaturazione (DEN, blu) nell’angolo di ogni
canale della vaschetta usato.
2. Aggiungere 10 µl di ciascuna delle due reazioni di amplificazione, miscelare
bene col puntale e incubare per 5 minuti a temperatura ambiente.
Nel frattempo estrarre con una pinzetta le strisce e numerarle con una matita al
di sotto della marcatura colorata. Maneggiare le strisce sempre con i guanti.
3. Aggiungere con attenzione 1 ml di Tampone di ibridazione (HYB, verde) preriscaldato
in ogni canale utilizzato. Agitare gentilmente la vaschetta fino a
rendere la soluzione omogeneamente colorata.
Fare attenzione a non far traboccare il liquido nei canali vicini.
4. Con le pinzette porre le strisce nei canali da utilizzare.
Le strisce devono essere completamente immerse nella soluzione e con il lato
su cui sono adese le sonde (identificabile dalla presenza di una marcatura colorata
alla base della striscia) rivolto verso l’alto. Nel caso in cui la striscia si volti
nel momento in cui è posta nel liquido, rimetterla nel giusto orientamento con le
pinzette, che vanno poi accuratamente pulite per evitare contaminazioni. Questo
procedimento si applica a tutti i passaggi seguenti.
5. Porre la vaschetta su un agitatore all’interno di un bagno termostatato/Twin-
Cubator ® e incubare per 30 minuti a 45°C.
Regolare in modo appropriato la frequenza dell’agitatore per miscelare la soluzione
in modo ottimale. Per assicurare un riscaldamento adeguato la vaschetta
dovrebbe restare immersa per almeno 1/3 della sua altezza.
6. Aspirare completamente il Tampone di ibridazione.
Usare, ad esempio, una pipetta Pasteur o un puntale collegato a una pompa a
vuoto.
7. Aggiungere 1 ml di soluzione di lavaggio stringente (STR, rosso) ad ogni striscia
e incubare per 15 minuti a 45°C sull’agitatore nel bagno termostatato/Twin-
Cubator ® .
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