RESÚMENES DE LAS COMUNICACIONES - Medicina (Buenos Aires)

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MEDICINA - Volumen 64 - (Supl. II), 2004
4977-ADNmt en 14 muestras de músculo estriado obtenido de
pacientes sometidos a cirugías programadas, con diagnóstico de
ECV (n=7, Fem/Masc:1/6, 38 a 82 años) y libres de ECV (n=7,
Fem/Masc:3/4, 31 a 88 años), sin diferencias significativas en
edad. No se incorporaron muestras de diabéticos. Se realizaron
diluciones del ADN extraído -300 a 25 ng- para amplificar 389
pb que muestra presencia de deleción, y 75 a 0,1 ng para amplificar
un fragmento de 440 pb del ADNmt total. Se fotografiaron
productos de dilución en geles de agarosa y se cuantificó
con Image Quant 5.1. A partir del gráfico semilog de disminución
de DO de los productos de PCR en función de ng ADN, se
calculó regresión lineal y la proporción de ng de 4977-ADNmt con
respecto a ADNmt total. Las muestras ECV mostraron mayor
acumulación de 4977-ADNmt (mediana: 0.052% rango: 0.036-
0.100) que las sin ECV (0.024%, 0.012-0.075), p=0.042. La
deleción correlacionó con el aumento de la edad r=0.76, p=0.016.
El aumento en la acumulación de 4977-ADNmt en ECV podría
explicarse por el mayor estrés oxidativo asociado con la enfermedad
isquémica. Cuantificar la deleción en un mayor número
de muestras podría esclarecer mecanismos subyacentes de la
enfermedad aterosclerótica.
BIOLOGÍA MOLECULAR - GENÉTICA 2
33. (6652) UNA NUEVA MUTACION EN EL EXON 2 DEL GEN
DE LA GLUCOKINASA. LóPEZ, ARIEL PABLO; CERRONE,
GLORIA; CAPUTO, MARIELA; PEREZ, MARIA SILVIA;
ALVAREZ, MONICA; TARGOVNIK, HECTOR MANUEL;
FRECHTEL, GUSTAVO DANIEL
Cátedra de Genética y Biología Molecular. Facultad de
Farmacia y Bioquímica. UBA.
Antecedentes: la Diabetes tipo MODY es un subtipo de Diabetes
tipo 2, con herencia autosómica dominante que se caracteriza
por su aparición en la edad infanto juvenil. A diferencia de
la Diabetes tipo 1, los pacientes generalmente no requieren
insulina al comienzo de la enfermedad. Existen 6 formas clínicas
de las cuales el MODY 2 tiene su causa genética determinada
por mutaciones en el gen de la glucokinasa. Objetivos:
confirmar en un paciente con fenotipo clínico compatible con
MODY 2 la alteración genética causante de la enfermedad mediante
técnicas de biología molecular estudiando posibles alteraciones
en el gen de la glucokinasa. Material y métodos: a partir
de sangre periférica del individuo se purificó el ADN por el
método de digestión con CTAB. Se rastreó la posible presencia
de mutaciones en alguno de los diez exones del gen de la
glucokinasa con la utilización combinada de los métodos de PCR
y SSCP y la posterior secuenciación de los fragmentos que presentaron
patrones alterados de corrida electroforética. Resultados:
se encontró una mutación en el exón número 2 que consiste
en una transcisión que cambia el codón 43 del gen de la
glucokinasa de CGC a AGC, en forma heterocigota, lo que produce
un cambio de Arg por Ser a nivel de la proteína. Esta mutación,
aún no descripta, podría ser la causa de la enfermedad
en este individuo. Conclusiones: al ser la Diabetes una enfermedad
heterogénea y multifactorial, resulta extremadamente complicado
desde el punto de vista clínico el diagnóstico certero de
cada subtipo. Establecer la causa genética del MODY es de fundamental
importancia ya que de ello depende directamente la
terapia que se va a instaurar. El estudio de mutaciones en el gen
de la glucokinasa por medio de los métodos de PCR, SSCP y
secuenciación, permite realizar una genotipificación específica,
en este caso de subtipo MODY 2. De esta manera se puede instituir
en el paciente la terapia farmacológica mas adecuada según
la alteración genética presente.
34. (6985) PEQUEÑAS DELECIONES E INSERCIONES EN
EL GEN DEL FACTOR VIII CAUSALES DE HEMOFILIA
A SEVERA: 9 MUTACIONES NO REPORTADAS.
ROSSETTI, LILIANA; RADIC, PAMELA; LARRIPA, IRENE;
DE BRASI, CARLOS
Academia Nacional de Medicina. Instituto de Investigaciones
Hematológicas Mariano R Castex, Academia Nacional
de Medicina
En hemofilia A (HA) el análisis directo de la mutación causal
en el gen del factor VIII (F8) constituye la ruta ideal para la provisión
de asesoramiento genético. El objetivo de este trabajo es
identificar y analizar los efectos de las mutaciones Ins/Del en
familias con HA severa (HAs). Se estudiaron muestras de
probandos de 30 familias con HAs y negativas para las grandes
inversiones y deleciones de F8. Primero, se amplificaron por PCR
las regiones génicas codificantes (35 amplímeros), luego se aplicó
la técnica de Conformation Sensitive Gel Electrophoresis
(CSGE), con subsecuente secuenciación del segmento señalado.
Mediante estudios de predicción bioinformática utilizando el
programa nnpredict se analizaron las potenciales consecuencias
en la estructura secundaria del F8 mutado en los 2 cambios In-
Frame caracterizados. En un total de 65 familias con HAs se
detectaron 12 mutaciones específicas de familia, 3 recurrentes
y 9 nuevas. Tres correspondieron a pequeñas inserciones (Ins)
ninguna de ellas previamente reportada: c.435insTTT
(p.D145_K146insF) In-Frame; c.5592insA Frameshift +1 (A-run);
y c.3500insA Frameshift +1 (A-run); y 9 resultaron pequeñas
deleciones (Del): c.208_211delTTTG Frameshift –4; c.6049delG
Frameshift –1; c. 2014_2016delTTC (p.F672del) In-Frame ya reportadas;
y c.3756delG Frameshift –1; c.6919_6920delGA
Frameshift –2; c.5689_5690delCT Frameshift –2; c.4388_4391del
CTTT Frameshift –4; c.1409delC Frameshift –1; y c.2490delC
Frameshift –1 (No A-run); aún no reportadas. En 4/13 (30%) casos
con Ins/Del se detectó anticuerpo inhibidor. Los datos de
frecuencia y riesgo relativo de inhibidor asociados a Ins/Del resultan
similares a los reportados en la literatura. El estudio
bioinformático permitió predecir cambios en la estructura secundaria
del F8 que determinarían el fenotipo severo asociado a las
Ins/Del In-Frame. El abordaje presentado permite la provisión de
información segura y directa para asesoramiento genético en
familias con HA severa.
35. (7018) CAMBIOS DE FALSO Y NO-SENTIDO DEL GEN
DEL FACTOR VIII EN HEMOFÍLICOS A SEVEROS: 6
NUEVAS MUTACIONES. ROSSETTI, LILIANA; RADIC,
PAMELA; LARRIPA, IRENE; DE BRASI, CARLOS
Instituto de Investigaciones Hematológicas Mariano R
Castex, Academia Nacional de Medicina
La Hemofilia A (HA) es una coagulopatía hereditaria ligada
al sexo, originada por defectos en el gen factor VIII (F8). Además
de las inversiones y las grandes deleciones causales de la
mayoría de las HA severas (HAs), es importante la detección de
mutaciones pequeñas, responsables de los restantes defectos
moleculares. Los objetivos de este trabajo fueron identificar y
analizar las mutaciones missense y nonsense en familias Argentinas
con HAs. Se detectó la presencia de pequeñas mutaciones
en un grupo de 65 familias con HAs, por la técnica de
Conformation Sensitive Gel Electrophoresis (CSGE) y se estudiaron
mediante esta misma técnica 80 cromosomas X de individuos
sanos de la población Argentina. Mediante el programa
nnpredict se analizaron los posibles cambios en la estructura
secundaria asociada al F8 mutado. En 9 familias se caracterizaron
mutaciones puntuales: 4 nonsense, que determinan la terminación
prematura de la traducción y el fenotipo severo, 2 reportadas
c.6496T>A (p.2166R>X), c.2443C>T (p.815Q>X), y 2 no
reportadas, c.6825T>A (p.2275Y>X), c.1656C>A (p.552Y>X); 5
missense que afectaron aminoácidos conservados entre las 4
especies analizadas (humano, porcino, murino y canino), 1 reportada
c.6683G>A (p2228R>Q), y 4 no reportadas, c.6959T>C
(p.2320L>S), c.755C>A (p.252T>K), c.6947T>C (p2316L>P), y
c.5881T>A (p.1961W>R). En los 80 cromosomas X normales
analizados se confirmó la ausencia de estas mutaciones. Mediante
el estudio molecular exhaustivo del F8 se lograron caracteri-