RESÚMENES DE LAS COMUNICACIONES - Medicina (Buenos Aires)

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MEDICINA - Volumen 64 - (Supl. II), 2004
ultraestructural. Resultados: Proliferación: El IGF-1 aumentó
significativamente la proliferación de las células lactotropas, con
todas las dosis aplicadas. Ge revirtió parcialmente el incremento
de la actividad mitótica originada por IGF-1. Inmunolocalización
y morfología: La IF reveló la presencia de células positivas para
IGF-1R en cultivo de células adenohipofisarias. Mediante IE se
evidenciaron células marcadas para IGF-1R con características
morfológicas de gonadotropas. Las mismas presentaron gran
desarrollo de las organelas proteinopoyéticas, con abundantes
gránulos en el citosol. Las lactotropas de los modelos estimulados
con IGF-1 mostraron una morfología ultraestructural característica
de células activas en la síntesis proteica. Los resultados
obtenidos nos permiten inferir la presencia de receptores para
IGF-1 en células gonadotropas adenohipofisarias, evidenciando
que el IGF-1 estimularía la proliferación de las células lactotropas
por un mecanismo de tipo paracrino.
76. (7485) MECANISMOS MOLECULARES DE MODULACIÓN
DE LA DESENSIBILIZACIÓN DEL RECEPTOR NICOTÍ-
NICO. SPITZMAUL, GUILLERMO; GUMILAR, FERNANDA;
DILGER, JAMES; BOUZAT, CECILIA
Instituto de Investigaciones Bioquímicas - Bahía Blanca
La desensibilización es la disminución o pérdida de respuesta
biológica como consecuencia de una estimulación prolongada
o repetida. Este fenómeno es una característica común de
todos los miembros de la familia de receptores «cys-loop» y se
observa como una caída de la corriente macroscópica durante
una exposición prolongada al neurotransmisor. Los agentes
farmacológicos son capaces de modular este proceso por diversos
mecanismos y poseen por lo tanto una importancia fisiológica
y terapéutica. Nuestro objetivo fue el de caracterizar los mecanismos
de acción de compuestos que actúan sobre la
desensibilización. Para ello utilizamos la técnica de «patchclamp»
en las configuraciones «cell-attached» y «outside–out».
Las drogas estudiadas pertenecen a distintas familias, tales como
anestésicos locales (proadifén y adifenina), drogas antimaláricas
(quinacrina), antidepresivos tricíclicos (amitriptilina, imipramina y
doxepina) y el colorante cristal violeta. En base a su mecanismo
de acción, pudimos agrupar estos compuestos en tres grupos:
a) drogas que aumentan la desensibilización desde el estado
abierto del canal: quinacrina, adifenina; b) drogas que aumentan
la velocidad de desensibilización desde el estado cerrado:
proadifén y cristal violeta y c) drogas que actúan por ambos
mecanismos: antidepresivos. También analizamos el efecto de
proadifén y doxepina sobre el AChR mutado en eT264P, el cual
se asocia a un síndrome miasténico congénito. Proadifén reduce
la frecuencia de aperturas y doxepina disminuye la duración
de las aperturas. Por diferentes mecanismos, ambas drogas serían
beneficiosas para revertir la cinética alterada de estos receptores
mutados. Nuestros estudios demuestran que el mecanismo
de desensibilización es sumamente complejo y que es
modulado por una gran variedad de compuestos actuando sobre
diferentes estados conformacionales. A su vez, fármacos que
aumenten la desensibilización del AChR podrían ser eficaces para
el tratamiento de enfermedades asociadas a ganancia de función
en estos receptores
77. (7491) ACTIVACIÓN DEL RECEPTOR NICOTÍNICO POR
AGONISTAS GABAÉRGICOS. BRAVO, MATíAS;
SPITZMAUL, GUILLERMO; BOUZAT, CECILIA
Instituto de Investigaciones Bioquímicas - Bahía Blanca
El receptor nicotínico de acetilcolina (AChR) es un pentámero
de subunidades homólogas perteneciente a la familia de receptores
«cys-loop» con una composición alfa[2]-beta-epsilon-delta
en el AChR muscular. Dada la homología entre receptores de
esta familia decidimos determinar si agonistas GABAérgicos son
capaces de activar receptores colinérgicos. Con tal fin utilizamos
la técnica de «patch-clamp» en la configuración «cell-attached»
y activamos al AChR, normal o mutado en residuos que afectan
la afinidad, con distintas concentraciones de ácido gamaaminobutírico
(GABA). El AChR salvaje es capaz de activarse a
100 µM de GABA. Comparadas con las de ACh, las aperturas
de los canales son 8 veces más breves. La amplitud y duración
del canal activado por GABA no se modifican con la concentración
del agonista, revelando que GABA no produce bloqueo del
canal. Aún a concentraciones tan elevadas como 50 mM las
aperturas no ocurren como eventos sucesivos, característicos de
agonistas potentes. Este hecho indica que si bien GABA activa
al AChR, lo hace con muy baja potencia. Con el fin de determinar
los residuos involucrados en la unión de GABA al sitio de
agonista, estudiamos al receptor mutado en alfaG153. Esta posición
es determinante en la unión de ACh y cuando se muta a
serina aumenta la afinidad. alfaG153S es también mucho más
sensible a la activación por GABA. Los canales se pueden detectar
a partir de 1 µM de GABA y se observan numerosas aperturas
sucesivas. Las propiedades cinéticas son similares a las
observadas por activación con ACh sobre el mismo receptor.
Como conclusión, determinamos que GABA es un agonista débil
del AChR y el residuo alfaG153 se encontraría involucrado
en la afinidad de GABA por el AChR y su potencia de activación.
Subsidiado por ANPCyT, UNS y CONICET.
78. (7531) CARACTERIZACIÓN A NIVEL DE CANAL ÚNICO DE
RECEPTORES NICOTÍNICOS HOMOMÉRICOS. RAYES,
DIEGO; SPITZMAUL, GUILLERMO; BOUZAT, CECILIA
Instituto De Investigaciones Bioquimicas De Bahia Blanca
(INIBIBB)
La familia de receptores «Cys-Loop» comprende los receptores
nicotínicos (AChRs), de serotonina (5HT[3A]), de GABA
(AyC) y de glicina. Dentro de los nicotínicos existen receptores
heteropentaméricos y el homopentámero alfa-7 neuronal. Dado
su rol esencial en diversos procesos del sistema nervioso, la
farmacología de este último ha sido ampliamente estudiada. Sin
embargo no se ha logrado hasta el momento una caracterización
electrofisiológica a nivel de canal único debido a su baja
expresión en sistemas heterólogos. Con la finalidad de encontrar
un modelo válido para realizar este estudio, utilizamos un
receptor quimérico que contiene el dominio extracelular de alfa-
7 y los segmentos transmembranales de 5HT[3A] y que presenta
alta expresión en células. Además realizamos mutaciones
sobre la región transmembranal para aumentar la conductancia
y poder así resolver los canales únicos. La activación por
agonistas permite observar eventos de apertura con una
conductancia de 99 pS . La mínima concentración de agonista a
la cual se observa activación es 10, 50 y 300 µM para nicotina,
ACh y colina, respectivamente. A estas concentraciones los tiempos
de estado abiertos son semejantes para nicotina y ACh y
son 3 veces más breves en presencia de colina. Con ninguno
de los agonistas estudiados se observan eventos repetitivos de
apertura y cierre a alta concentraciones, sugiriendo un proceso
de desensibilización rápido. Tanto nicotina como ACh actúan
además como bloqueadores de canal abierto, siendo las constantes
de afinidad para el bloqueo (K[B]) de 18.7 y 45mM, respectivamente.
A su vez, se observa una reducción de la
conductancia con concentraciones crecientes de Ca(++) y
Mg(++), indicando un bloqueo rápido de canal abierto por parte
de los mismos (K[B] = 7.8 y 4 mM, respectivamente). Este trabajo
tiene como objetivo establecer un modelo válido para el
estudio a nivel de canal único de la región extracelular del receptor
alfa-7 con el fin de dilucidar mecanismos de acción de
drogas y fármacos que modulan su actividad.
79. (7543) ACCIÓN DE LOS AGENTES ANTIHELMÍNTICOS
LEVAMISOL Y PIRANTEL SOBRE RECEPTORES ALFA-
7 NICOTINICOS. BARTOS, MARIANA; RAYES, DIEGO;
BOUZAT, CECILIA
Instituto De Investigaciones Bioquimicas De Bahia Blanca
(INIBIBB)
El levamisol y el pirantel son agentes antihelmínticos que ejercen
sus efectos terapéuticos actuando como agonistas comple-